Adeno-associeret virus

adeno-associeret virus

Adeno-associerede vira
videnskabelig klassifikation
Gruppe:Virus [1]Rige:MonodnaviriaKongerige:ShotokuviraeType:cossaviricotaKlasse:QuintoviricetesBestille:PiccoviralesFamilie:ParvovirusUnderfamilie:ParvovirinaeSlægt:DependoparvovirusUdsigt:adeno-associeret virus
Internationalt videnskabeligt navn
Adeno-associeret dependoparvovirus A
Synonymer
  • Adeno-associeret virus 1 [2]
  • Adeno-associeret virus-1 [2] [3]
  • Adeno-associeret virus-2 [3]
  • Adeno-associeret virus-3 [3]
  • Adeno-associeret virus-4 [3]
Baltimore-gruppen
II: ssDNA-vira

Adeno-associeret virus ( eng.  Adeno-associeret dependoparvovirus A , AAV) er en lille virus , der inficerer celler hos mennesker og nogle andre primater . Den adeno-associerede virus ser ikke ud til at forårsage sygdom hos mennesker og fremkalder derfor et svagt immunrespons.

Adeno-associeret virus kan inficere delende og ikke-delende celler og kan integrere sit genom i værtsgenomet. Disse funktioner gør AAV til en særlig attraktiv kandidat til design af virale vektorer til genterapi [4] .

Adeno-associeret virus tilhører Dependoparvovirus- slægten af ​​parvovirusfamilien ( Parvoviridae ). Virusset er lille (20 nm), har ikke en lipidkappe og koder ikke for sine egne replikationsenzymer .

Historie

I 1965 udgav Robert Atchison et papir, der beskrev en ny virus kaldet adeno-associeret virus [5] . Viruspartikler er blevet påvist ved elektronmikroskopi i abe -adenoviruspræparater , der er blevet transplanteret flere gange på primære rhesus-abe -nyrecellekulturer . Atchison-gruppen separerede 24 nm partikler af det nye virus fra større 80 nm adenovirus partikler ved hjælp af ultrafiltrering [6] .

Efter isolering blev det vist, at delvist oprensede adeno-associerede virusvirioner ikke kan replikere alene , men kan replikere og spredes i adenovirus-inficerede kulturer . Det adeno-associerede virus viste sig således at være en defekt ledsagende virus, der har brug for en hjælpevirus til fuld replikation. Da det adeno-associerede virus ikke koder for sin egen DNA-polymerase , kræver det et hjælpevirus, normalt et adenovirus, for at replikere [7] .

I juli 2013, som et resultat af en revision af familien, blev 4 nært beslægtede arter slået sammen til én, hvilket ændrede navnet på slægten til Dependoparvovirus , og navnet på arten til Adeno-associeret dependoparvovirus A [3] .

Vektor til genterapi

Fordele og ulemper

Vildtype adeno-associeret virus har nogle fordele til genterapi . En af de vigtigste fordele er, at denne virus ikke er patogen . Adeno-associeret virus kan inficere ikke-delende celler og kan integreres i værtsgenomet på specifikke steder (AAVS1) på det nittende kromosom [8] .

Denne funktion gør adeno-associeret virus mere forudsigelig end retrovira . Retrovira er potentielt farlige som mutagener , da de tilfældigt indsættes i værtsgenomet, hvilket kan føre til fremkomsten af ​​kræftsvulster. Det adeno-associerede virusgenom indsætter sædvanligvis på et specifikt sted, og tilfældige insertioner forekommer med ubetydelig frekvens. Når der skabes vektorer til genterapi baseret på adeno-associeret virus, fjernes rep- og cap -generne fra det virale DNA . Det ønskede gen, sammen med promotoren , indsættes mellem inverterede terminale gentagelser ( inverterede terminale gentagelser, ITR) , som et resultat af hvilke concatamerer dannes i kernen efter syntesen af ​​den anden DNA -streng af den cellulære DNA-polymerase .  Vektorer til genterapi baseret på adeno-associerede vira danner episomale konkatamerer i værtscellens kerne. I ikke-delende celler forbliver disse konkatamerer intakte; i delende celler går adeno-associeret virus-DNA tabt under celledelinger, da episomalt DNA ikke replikeres under værtscelle- DNA-replikation . Utilsigtet indsættelse af adeno-associeret virus-DNA i værtsgenomet er meget sjælden. Adeno-associeret virus har også meget lav immunogenicitet , tilsyneladende begrænset af den lave effektivitet til at producere neutraliserende antistoffer , mens sidstnævnte ikke har vist sig klart at være cytotoksisk [9] [10] [11] . De beskrevne funktioner, såvel som evnen til at inficere ikke-delende celler, bestemmer fordelene ved adeno-associeret virus frem for adenovira til genterapi.

Brugen af ​​adeno-associeret virus har også nogle ulemper. Kapaciteten af ​​virusgenomet til rådighed for kloning af terapeutiske gener er kun omkring 4800 basepar . Denne vektor er således ikke egnet til kloning af store gener. De omvendte terminale gentagelser af de to genomer kan hybridisere og danne hoved-hale-konkatamerer, hvilket næsten fordobler vektorens kapacitet.

Infektion med vildtypevirus forårsager ofte aktivering af humoral immunitet . Aktiviteten af ​​neutraliserende antistoffer reducerer i nogle tilfælde anvendeligheden af ​​AAV2- serotypen . AAV2 kan også trænge ind i hjernen og er meget neuronspecifik .

Kliniske forsøg

I øjeblikket gennemgår adeno-associerede virus-baserede lægemidler (vektorer) til behandling af cystisk fibrose og hæmofili den første fase af kliniske forsøg. Der er opnået lovende resultater fra den første fase af kliniske forsøg med lægemidler mod Parkinsons sygdom . Andre kliniske forsøg har vist sikkerheden af ​​adeno-associerede virusvektorer i Canavan sygdom , muskeldystrofi og Bilshovsky-

Kliniske forsøg med vektorer baseret på den adeno-associerede virale vektor [12]
Sygdom Gene Indgivelsesmåde Testfase Antal testpersoner Status
cystisk fibrose CFTR Lunger, aerosol jeg 12 Færdiggjort
CFTR Lunger, aerosol II 38 Færdiggjort
CFTR Lunger, aerosol II 100 Færdiggjort
Hæmofili B RETTE OP Intramuskulært jeg 9 Færdiggjort
RETTE OP leverarterie jeg 6 Færdig
Gigt TNFR:Fc intraartikulært jeg en Blive ved
arvelig emfysem AAT Intramuskulært jeg 12 Blive ved
muskeldystrofi Sarcoglycan Intramuskulært jeg ti Blive ved
Parkinsons sygdom GAD65, GAD67 inde i kraniet jeg 12 Fuldført [13]
Canavan sygdom AAC inde i kraniet jeg 21 Blive ved
Batten sygdom CLN2 inde i kraniet jeg ti Blive ved
Alzheimers syndrom NGF inde i kraniet jeg 6 Blive ved
spinal muskelatrofi SMN1 intrathecal I–III femten Adskillige forsøg gennemført, flere igangværende ( Zolgensma )

Kliniske forsøg til behandling af prostatacancer er i fase III fra 2005 [12] , men disse ex vivo undersøgelser inkluderer ikke direkte administration af ADV til patienter.

Patologi

Adeno-associeret virus anses ikke for at forårsage sygdom hos mennesker. Imidlertid har denne virus vist sig at være en risikofaktor for mandlig infertilitet [14] . Det genomiske DNA fra adeno-associerede vira findes i sædprøver med svækket struktur og funktion af spermatozoer . Der er dog ikke fundet nogen direkte sammenhæng mellem denne infektion og mandlig infertilitet.

Rolle i udviklingen af ​​hepatocellulært karcinom

Nylige undersøgelser af patienter med sjældne former for hepatocellulært karcinom tyder på, at AAV2-virus kan spille en rolle i udløserne af denne cancer. Da AAV2-viruset er rettet mod gener, der spiller en vigtig rolle i celle-reproduktion, mener forskerne, at infektion fører til deres overaktivering, hvilket resulterer i tumorvækst. Denne opdagelse sætter spørgsmålstegn ved sikkerheden ved at bruge AAV2-vira til genterapi [15] .

Struktur

Genom, transkriptom og proteom

Genomet af det adeno-associerede virus indeholder (+ eller -) enkeltstrenget DNA (ssDNA) med en længde på ca. 4,7 tusinde nukleotider. I enderne af det genomiske DNA-molekyle er der inverterede terminale gentagelser ( ITR'er ) .  Genomet indeholder to åbne læserammer ( ORF'er ) : rep og cap . Den første indeholder fire overlappende gener , der koder for Rep-proteiner, som er nødvendige for virussens livscyklus , den anden læseramme indeholder overlappende nukleotidsekvenser af capsidproteiner : VP1, VP2 og VP3, som danner det icosaedriske hoved af kapsiden [16] .  

Inverteret terminal gentagelser

Sekvensen af ​​inverterede terminale gentagelser ( eng.  Inverted Terminal Repeat, ITR ) er 145 nukleotider. ITR'er er placeret symmetrisk i genomet af adeno-associerede vira og er nødvendige for genomisk DNA- replikation [17] . En anden af ​​egenskaberne ved ITR er evnen til at danne hårnåle, som tillader syntesen af ​​den anden DNA-streng uden deltagelse af primase . Inverterede terminale gentagelser er også nødvendige for integrationen af ​​viralt DNA i en specifik region af det nittende humane kromosom og til frigivelse af provirus -DNA fra kromosomet [18] [19] såvel som til dannelsen af ​​komplekser af adeno-associeret virus-DNA med deoxyribonuklease-resistente kappeproteiner [20] .

I tilfælde af genterapi skal ITR være i cis-position efter det terapeutiske gen. Dette mønster anvendes til at opnå rekombinante vektorer baseret på adeno-associeret virus ( eng.  rekombinant AAV, rAAV ) indeholdende reporter- eller terapeutiske gener. Det er blevet vist, at ITR'er ikke er nødvendige i cis-positionen til replikation og kapsidfoldning. Et cis -virkende Rep-afhængigt element (CARE ) blev fundet i nukleotidsekvensen af ​​rep-genet . I cis-position forbedrer CARE replikationen og samlingen af ​​virale partikler [21] [22] [23] [24] .  

Gener og proteiner rep

"Venstre side af genomet " indeholder to promotorer  , p5 og p19, hvorfra to overlappende mRNA'er af forskellig længde transskriberes . Hvert gen, der koder for det tilsvarende mRNA, indeholder en intron , der kan udskæres under splejsningsprocessen . Som et resultat kan fire forskellige mRNA'er syntetiseres, og følgelig fire forskellige Rep-proteiner med overlappende sekvenser. Proteiner er navngivet efter deres molekylære masser i kDa : Rep78, Rep68, Rep52 og Rep40 [25] . Rep78 og 68 binder specifikt som en primer en hårnål dannet af inverterede terminale gentagelser og skærer den derefter ved det terminale opløsningssted . Rep78 og 68 har vist sig at være nødvendige for den specifikke integration af adeno-associeret virus-DNA i værtsgenomet. Fire Rep-proteiner binder ATP og har helicaseaktivitet . Disse proteiner øger transkriptionen fra p40-promotoren, men svækker transkriptionen fra p5- og p19-promotoren [19] [25] [26] [27] [28] [29] .  

cap -gener og VP-proteiner

Den "højre side" af (+) strengen af ​​det adeno-associerede virus genomiske DNA indeholder overlappende sekvenser, der koder for tre capsidproteiner  , VP1, VP2 og VP3. Transskription af disse gener starter fra en enkelt promotor , p40. Molekylvægten af ​​de tilsvarende proteiner er henholdsvis 87, 72 og 62 kDa [30] . Alle tre proteiner er translateret fra det samme mRNA. Efter transkription kan præ-mRNA'et splejses på to forskellige måder, hvorved en længere eller kortere intron udskæres og mRNA'er på 2300 eller 2600 nukleotider dannes . Sædvanligvis, især i nærvær af adenovirus , udskæres en længere intron. I denne form skæres den første startkodon AUG ud , hvorfra syntesen af ​​VP1-proteinet begynder, og niveauet af VP1-proteinsyntesen falder. Det første kodon AUG, der forbliver i tilfælde af et længere transkript , er startkodonet for VP3-proteinet. Nukleotidsekvensen, der går forud for dette kodon inden for den samme læseramme, indeholder imidlertid sekvensen , der ACGkoder for threonin , som er omgivet af den optimale Kozak-sekvens . Dette fører til et fald i syntesen af ​​VP2-proteinet (som er et VP3-protein med yderligere aminosyrerester i N-terminalen [31] [32] [33] [34] .

Da den større intron fortrinsvis udskæres fra præ-mRNA'et, og da kodonet ACGer et svagere startkodon, udtrykkes de tilsvarende proteiner in vivo i et forhold på ca. 1:1:20, og proteinerne er også inkluderet i viruspartiklen i samme forhold [35] . Et unikt fragment ved N-terminalen af ​​VP1-proteinet har phospholipase A2 ( PLA2 ) aktivitet ,  som sandsynligvis er nødvendig for frigivelsen af ​​virale partikler fra sene endosomer [36] . Muralidar et al viste, at VP2- og VP3-proteinerne er essentielle for samlingen af ​​en viral partikel [33] . Warrington et al viste, at VP2-proteinet ikke er strengt nødvendigt for samlingen af ​​en viral partikel, og det påvirker heller ikke virusets patogene egenskaber. Funktionen af ​​VP2-proteinet påvirkes imidlertid ikke af signifikante insertioner i den N-terminale del, mens insertioner i VP1 reducerer dets phospholipaseaktivitet [ 37] .

Krystalstrukturen af ​​VP3-proteinet blev bestemt i 2002 af Xi og Bew et al . [38] .

Serotyper og receptorer

I 2006 var 11 adeno-associerede virusserotyper blevet beskrevet [39] . Alle kendte serotyper kan inficere celler i mange vævstyper . Vævsspecificitet bestemmes af serotypen af ​​capsidproteinerne , så adeno-associerede virusvektorer er designet til at specificere den ønskede serotype.

Serotype 2

Adeno-associeret virus serotype 2 har været den mest omfattende undersøgte [40] [41] [42] [43] [44] [45] . Adeno-associeret virus serotype 2 har en naturlig affinitet til skeletmuskulatur [46] , neuroner [40] , vaskulær glat muskulatur [47] og hepatocytter [48] .

Tre cellulære receptorer er blevet beskrevet for adeno-associeret virus serotype 2: heparansulfat proteoglycan (HSPG ) , integrin a  Vβ5 og fibroblast vækstfaktor receptor 1 ( FGFR - 1 ) . Førstnævnte er den primære receptor, de to sidstnævnte er co-receptorer, og tillader adeno-associeret virus at trænge ind i cellen ved receptor-medieret endocytose [49] [50] [51] [52] . HSPG er signifikant til stede i det ekstracellulære stof og fungerer som en primær receptor, mens det renser kroppen for adeno-associerede viruspartikler og reducerer infektionseffektiviteten [53] .  

Undersøgelser har vist, at adeno-associeret virus serotype 2 dræber kræftceller uden at beskadige raske celler. "Vores undersøgelser har vist, at adeno-associeret virus type 2, som inficerer en stor population af celler, dræber mange typer kræftceller, men ikke sunde celler," siger Craig Meyer , professor i immunologi og mikrobiologi ved Penn State College of Medicine i Pennsylvania [54] . Disse undersøgelser kan føre til skabelsen af ​​nye lægemidler mod kræft.

Andre serotyper

Selvom adeno-associeret virus serotype 2 er den mest populære serotype i videnskabelig forskning, har andre serotyper vist sig at være mere effektive genleveringsvektorer . For eksempel er adeno-associeret virus serotype 6 bedre til at inficere luftvejsepitelceller, serotype 7 virus har et meget højt niveau af transduktion af museskeletmuskelceller, serotype 8 virus transducerer hepatocytter godt [55] [56] [57] , og serotype 1 og 5 vira er meget effektive, leverer gener til vaskulære endotelceller [58] . Adeno-associeret virus serotype 6, som er en hybrid af serotype 1 og 2 [57] , har også lavere immunogenicitet end serotype 2 virus [56] .

Serotyper adskiller sig i de receptorer, som de binder sig til. For eksempel kan transduktion af serotype 4- og 5-virus hæmmes af sialinsyreopløsning [59] , mens serotype 5-virus trænger ind i cellerne gennem blodpladevækstfaktorreceptoren [60] .

Immunrespons

Adeno-associeret virus er af særlig interesse for genterapi på grund af dets begrænsede evne til at inducere et immunrespons hos mennesker. Denne egenskab ved denne virus gør den særlig velegnet til transduktion , da den reducerer risikoen for immunpatologier.

Medfødt immunitet

Dyr viser et medfødt immunrespons på adeno-associeret virus. Intravenøs administration af virussen til mus forårsager produktion af inflammatoriske cytokiner , infiltration af neutrofiler og andre leukocytter i leveren , hvilket ser ud til at reducere antallet af injicerede virale partikler betydeligt [61] .

Humoral immunitet

Det har vist sig, at virussen kan forårsage en humoral reaktion hos både dyr og mennesker. Op til 80 % af den menneskelige befolkning er seropositive serotype 2. Det er blevet vist, at neutraliserende antistoffer kan reducere transduktionen af ​​adeno-associerede virusvektorer ad flere administrationsveje [62] .

Cellulær immunitet

Det cellulære immunrespons på virussen og vektorer afledt af virussen var ikke godt forstået før 2005 [62] . Kliniske undersøgelser af en vektor baseret på adeno-associeret virus serotype 2 til behandling af hæmofili B har vist, at ødelæggelse af transducerede celler kan forekomme [63] . Undersøgelser har vist, at CD8+ T-lymfocytter kan genkende elementer af det adeno-associerede viruskapsid in vitro [64] , hvilket indikerer potentialet for et cytotoksisk respons på vektorer i forhold til T - lymfocytter . Disse undersøgelser er imidlertid ufuldstændige, og muligheden for et sådant cytotoksisk respons er ikke blevet fuldt ud undersøgt.

Livscyklus

I livscyklussen for en adeno-associeret virus, fra celleinfektionsstadiet til dannelsen af ​​nye viruspartikler, kan der skelnes mellem flere stadier:

  1. vedhæftning til plasmamembranen
  2. endocytose
  3. bevægelse i endosomet
  4. udgang fra sent endosom eller lysosom
  5. flytte til cellekernen
  6. produktion af replikativt viralt dobbeltstrenget DNA
  7. rep -genekspression
  8. genomisk DNA- replikation
  9. ekspression af cap -gener , syntese af datter enkeltstrenget DNA
  10. virion samling
  11. frigivelse af virale partikler fra en inficeret celle

Nogle af disse trin kan variere afhængigt af celletypen. Parametrene for viral DNA-replikation kan også variere blandt celler af samme type, afhængigt af stadiet af cellecyklussen [65] .

Adeno-associeret virus er ikke i stand til at replikere i celler, der ikke er inficeret med adenovira . Dette træk ved dannelse af virale partikler indikerer, at adeno-associeret virus stammer fra adenovira. Adeno-associeret virus-DNA-replikation har vist sig at være lettet i nærvær af visse proteiner fra adenovira [66] [67] eller andre vira såsom herpes simplex [68] eller genotoksiske midler såsom ultraviolet stråling eller hydroxyurinstof [69] [70 ] [71] .

Det minimale sæt af adenovirusgener, der kræves til udbredelsen af ​​adeno-associerede vira, blev beskrevet af Matsushita og Ellinger et al . [66] . Denne opdagelse gjorde det muligt at skabe rekombinante adeno-associerede vira, der ikke kræver co-infektion med adenovirus. I fravær af hjælpervira eller genotoksiske faktorer kan adeno-associeret virus-DNA indsættes i værtsgenomet i episomal form. I det første tilfælde udføres integration i værtsgenomet af Rep78- og Rep68-proteinerne og kræver tilstedeværelsen af ​​inverterede terminale gentagelser ( ITR ), der flankerer den indsatte sekvens .  Hos mus kan det adeno-associerede virusgenom opholde sig som et episom (cirkulært DNA, hoved-til-hale-orientering) i ikke-delende væv - for eksempel i skeletmuskulaturen [72] .

Se også

Noter

  1. ↑ Taxonomy of Viruses  på webstedet International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) .
  2. ↑ 1 2 ICTV-taksonomihistorie: Adeno-associeret dependoparvovirus A på ICTV-webstedet  ( Få adgang  7. maj 2017) .
  3. ↑ 1 2 3 4 5 Rationalisering og udvidelse af taksonomien for familien Parvoviridae  : [ eng. ] // ICTVonline. — Kode tildelt: 2013.001a-aaaV. - 2013. - S. 8.
  4. ↑ Grieger JC, Samulski RJ Adeno-associeret virus som genterapivektor: vektorudvikling, produktion og kliniske anvendelser  (engelsk)  // Fremskridt inden for biokemisk ingeniørvidenskab/bioteknologi. - Berlin , Tyskland , 2005. - Iss. 99 . - S. 119-145. — PMID 16568890 .
  5. ↑ Atchison RW, Castro BC, Hammon WM. Adenovirus-associerede defekte viruspartikler  (engelsk)  // Science. - 1965. - Bd. 149 . - s. 754-756 .
  6. ↑ Smith RH Adeno-associeret virusintegration: virus versus vektor // Genterapi. - 2008. - T. 15 , nr. 11 . - S. 817-822 . - doi : 10.1038/gt.2008.55 .
  7. ↑ Ni TH, McDonald WF, Zolotukhin I, Melendy T, Waga S, Stillman B, Muzyczka N. Cellulære proteiner, der kræves til adeno-associeret virus-DNA-replikation i fravær af adenovirus-co-infektion // J Virol. - 1998. - T. 72 . - S. 2777-2787 .
  8. ↑ Surosky, RT; Urabe, M & Godwin, S.G. et al. (1997), Adeno-associerede virus Rep-proteiner målretter DNA-sekvenser til et unikt locus i det humane genom, Journal of virology v . 71 (10), PMID 9311886 
  9. ↑ Chirmule, N; Propert, K ​​og Magosin, S et al. (1999), Immunreaktioner på adenovirus og adeno-associeret virus hos mennesker, Genterapi (nr. september): 1574-83, PMID 10490767 
  10. ↑ Hernandez, YJ; Wang, J & Kearns, W.G. et al. (1999), Latent adeno-associeret virusinfektion fremkalder humorale, men ikke cellemedierede immunresponser i en ikke-human primatmodel, Journal of virology (nr. oktober): 8549-58, PMID 10482608 
  11. ↑ Ponnazhagan, S; Mukherjee, P & Yoder, MC et al. (1997), Adeno-associeret virus 2-medieret genoverførsel in vivo : organtropisme og ekspression af transducerede sekvenser i mus, Gen (nr. 29. april): 203-10, PMID 9185868 
  12. ↑ 1 2 Carter, BJ (2005), Adeno-Associated Virus Vectors in Clinical Trials, Human Gene Therapy bind 16: 541-50, PMID 15916479 
  13. ↑ Kaplitt, M.G.; Feigin, A; Under, MJ og andre (2007), Sikkerhed og tolerabilitet af genterapi med et adeno-associeret virus (AAV)-båret GAD-gen for Parkinsons sygdom: et åbent, fase I-forsøg, Lancet T. 369: 2097-2105, PMID 17586305 
  14. ↑ Erles K., Rohde V., Thaele M., Roth S., Edler L., Schlehofer JR DNA af adeno-associeret virus (AAV) i testikelvæv og i unormale sædprøver   // Hum . reproduktion. : journal. - 2001. - November ( bind 16 , nr. 11 ). - S. 2333-2337 . — PMID 11679515 .
  15. ↑ Nault JC et al. Tilbagevendende AAV2-relateret insertionsmutagenese i humane hepatocellulære karcinomer // Naturgenetik. – 2015.
  16. ↑ Carter, BJ (2000), Adeno-associerede virus og adeno-associerede virusvektorer til genlevering, i DD Lassic & N Smyth Templeton, Gene Therapy: Therapeutic Mechanisms and Strategies , New York City : Marcel Dekker, Inc., s. 41-59, ISBN 0-585-39515-2 
  17. ↑ Bohenzky, R.A.; LeFebvre, RB & Berns, KI (1988), Sekvens- og symmetrikrav inden for de interne palindromiske sekvenser af den adeno-associerede virusterminale gentagelse, Virology ( San Diego : Academic Press). - T. 166 (2), PMID 2845646 
  18. ↑ Wang, XS; Ponnazhagan & Srivastava (1995), Rednings- og replikationssignaler af det adeno-associerede virus 2-genom, Journal of Molecular Biology bind 250: 573-80, PMID 7623375 
  19. ↑ 1 2 Weitzman, MD; Kyostio, S.R.; Kotin, RM & Owens, RA (1994), Adeno-associated virus (AAV) Rep-proteiner medierer kompleksdannelse mellem AAV DNA og dets integrationssted i humant DNA, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 91 (13): 5808-12, PMID 8016070 
  20. ↑ Zhou, X & Muzyczka, N (1998), In vitro packaging of adeno-associated virus DNA, Journal of virology bind 72 (4): 3241-7, PMID 9525651 
  21. ↑ Nony, P; Tessier, J; Chadeuf, G & Ward, P et al. (2001), nyt cis-virkende replikationselement i det adeno-associerede virus type 2-genom er involveret i amplifikation af integrerede rep-cap-sekvenser, Journal of virology bind 75 (20): 9991-4, PMID 11559833 
  22. ↑ Nony, P; Chadeuf, G; Tessier, J & Moullier, P et al. (2003), Evidens for pakning af rep-cap-sekvenser i adeno-associeret virus (AAV) type 2-capsider i fravær af inverterede terminale gentagelser: en model til generering af rep-positive AAV-partikler, Journal of virology v . 77, PMID 12477885 
  23. ↑ Philpott, NJ; Giraud-Wali, C; Dupuis, C & Gomos, J et al. (2002), Effektiv integration af rekombinante adeno-associerede virus-DNA-vektorer kræver en p5-rep-sekvens i cis, Journal of virology v . 76 (11), PMID 11991970 
  24. ↑ Tullis, GE & Shenk, T (2000), Effektiv replikation af adeno-associerede virus type 2 vektorer: et cis-virkende element uden for de terminale gentagelser og en minimal størrelse, Journal of virology T. 74 (24), PMID 11090148 
  25. ↑ 1 2 Kyostio, S.R.; Owens, R.A.; Weitzman, M.D. & Antoni, B.A. et al. (1994), Analyse af adeno-associeret virus (AAV) vildtype og mutante Rep-proteiner for deres evner til negativt at regulere AAV p5 og p19 mRNA niveauer, Journal of virology bind 68 (5): 2947-57, PMID 8151765 
  26. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1990), AAV-oprindelsesbindingsproteinet Rep68 er en ATP-afhængig stedspecifik endonuklease med DNA-helicaseaktivitet., Cell T. 61 (3): 447-57, PMID 2159383 
  27. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1992), Delvis oprensning af adeno-associeret virus Rep78, Rep52 og Rep40 og deres biokemiske karakterisering, Journal of virology bind 66 (2): 1119-28, PMID 1309894 
  28. ↑ Samulski, RJ (2003), AAV vectors, the future workhorse of human gentherapy, Ernst Schering Research Foundation workshop (nr. 43): 25-40, PMID 12894449 
  29. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988a), Regulering af adeno-associeret virusgenekspression i 293 celler: kontrol af mRNA-overflod og translation, Journal of virology (nr. 1): 68-74, PMID 2824856 
  30. ↑ Jay, FT; Laughlin, CA & Carter, BJ (1981), Eukaryotisk translationskontrol: adeno-associeret virusproteinsyntese påvirkes af en mutation i det adenovirus DNA-bindende protein, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America T. 78 (5): 2927-31, PMID 6265925 
  31. ↑ Becerra, S. P.; Rose, JA; Hardy, M & andre (1985), Direkte kortlægning af adeno-associerede viruscapsidproteiner B og C: en mulig ACG-initieringskodon, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America bind 82 (23): 7919- 23, PMID 2999784 
  32. ↑ Cassinotti, P; Weitz, M & Tratschin, JD (1988), Organisation af det adeno-associerede virus (AAV) capsid-gen: kortlægning af et mindre splejset mRNA, der koder for viruscapsidprotein 1, Virology T. 167 (1): 176-84 , PMID 2847413 
  33. ↑ 1 2 Muralidhar, S; Becerra, SP & Rose, JA (1994), Site-directed mutagenese of adeno-associated virus type 2 struktural protein initiation codons: effects on Regulation of syntese and biologisk aktivitet, Journal of virology bind 68 (1): 170-6, PMID 8254726 
  34. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988b), Alternativ mRNA-splejsning er nødvendig for syntese af adeno-associeret virus VP1 capsidprotein, Journal of virology v . 62 (9): 3356-63, PMID 2841488 
  35. ↑ Rabinowitz, JE & Samulski, RJ (2000), Building a better vector: the manipulation of AAV virions, Virology T. 278 (2): 301-8, PMID 11118354 
  36. ↑ Girod, A; Wobus, CE; Zádori, Z & andre (2002), VP1-capsidproteinet af adeno-associeret virus type 2 bærer et phospholipase A2-domæne, der kræves til virusinfektivitet, The Journal of general virology T. 83 (5): 973-8, PMID 11961250 
  37. ↑ Warrington, KH, Jr; Gorbatyuk, OS; Harrison, JK og andre (2004), Adeno-associeret virus type 2 VP2 capsidprotein er ikke-essentielt og kan tolerere store peptidindsættelser ved dets N-terminale ende, Journal of virology bind 78 (12): 6595-609, PMID 15163751 
  38. ↑ Xie, Q; Bu, W; Bhatia, S & andre (2002), The atomic structure of adeno-associated virus (AAV-2), en vektor til human genterapi, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 99(16): 10405-10, PMID 12136130 
  39. ↑ Mori, S; Wang, L; Takeuchi, T & Kanda, T (2004), To nye adeno-associerede vira fra cynomolgus abe: pseudotyping karakterisering af capsidprotein, Virology T. 330 (2): 375-83, PMID 15567432 
  40. ↑ 12 Bartlett, J.S .; Samulski, RJ; McCown, TJ & andre (1998), Selektiv og hurtig optagelse af adeno-associeret virus type 2 i hjernen, Human genterapi bind 9 (8): 1181-6, PMID 9625257 
  41. ↑ Fischer, AC; Beck, SE; Smith, CI og andre (2003), Succesfuld transgenekspression med serielle doser af aerosoliserede rAAV2-vektorer i rhesus makakaber, Molekylær terapi: tidsskriftet for American Society of Gene Therapy bind 8 (6): 918-26, PMID 14664794 
  42. ↑ Nicklin, SA; Buening, H; Dishart, KL og andre (2001), Effektiv og selektiv AAV2-medieret genoverførsel rettet mod humane vaskulære endotelceller, Molekylær terapi: tidsskriftet for American Society of Gene Therapy bind 4 (3): 174-81, PMID 11545607 
  43. ↑ Rabinowitz, JE; Xiao, W & Samulski, RJ (1999), Insertionsmutagenese af AAV2-capsid og produktion af rekombinant virus, Virology T. 265 (2): 274-85, PMID 10600599 
  44. ↑ Shi, W & Bartlett, JS (2003), RGD-inkludering i VP3 giver adeno-associerede virus type 2 (AAV2)-baserede vektorer med en heparansulfat-uafhængig celleindgangsmekanisme, Molecular therapy: the journal of the American Society of Gene Terapi T. 7 (4): 515-25, PMID 12727115 
  45. ↑ Wu, P; Xiao, W; Conlon, T og andre (2000), Mutationsanalyse af det adeno-associerede virus type 2 (AAV2) capsidgen og konstruktion af AAV2 vektorer med ændret tropisme, Journal of virology bind 74 (18): 8635-47, PMID 10954565 
  46. ↑ Manno, CS; Chew, AJ; Hutchison, S & andre (2003), AAV-medieret faktor IX-genoverførsel til skeletmuskulatur hos patienter med svær hæmofili B, Blood T. 101 (8): 2963-72, PMID 12515715 
  47. ↑ Richter, M; Iwata, A; Nyhuis, J & andre (2000), Adeno-associeret virusvektortransduktion af vaskulære glatte muskelceller in vivo , Physiological genomics bind 2 (3): 117-27, PMID 11015590 
  48. ↑ Koeberl, D.D.; Alexander, IE; Halbert, CL & andre (1997), Vedvarende ekspression af human koagulationsfaktor IX fra muselever efter intravenøs injektion af adeno-associerede virusvektorer, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America vol . 94 (4): 1426 -31, PMID 9037069 
  49. ↑ Qing, K; Mah, C; Hansen, J & andre (1999), Human fibroblast vækstfaktor receptor 1 er en co-receptor for infektion med adeno-associeret virus 2, Nature medicine T. 5 (1): 71-7, PMID 9883842 
  50. ↑ Summerford, C & Samulski, RJ (1998), Membrane-associated heparan sulfate proteoglycan er en receptor for adeno-associerede virus type 2 virioner, Journal of virology T. 72 (2): 1438-45, PMID 9445046 
  51. ↑ Summerford, C; Bartlett, JS & Samulski, RJ (1999), AlphaVbeta5 integrin: en co-receptor for adeno-associeret virus type 2-infektion, Nature medicine T. 5 (1): 78-82, PMID 9883843 
  52. ↑ Qiu, J; Handa, A; Kirby, M & Brown, KE (2000), Interaktionen mellem heparinsulfat og adeno-associeret virus 2, Virology T. 269 (1): 137-47, PMID 10725206 
  53. ↑ Pajusola, K; Gruchala, M; Joch, H & andre (2002), Celletype-specifikke karakteristika modulerer transduktionseffektiviteten af ​​adeno-associeret virus type 2 og begrænser infektion af endotelceller, Journal of virology T. 76 (22): 11530-40, PMID 12388714 
  54. ↑ CNN.com (2005), Almindelig virus 'dræber cancer' , < http://www.cnn.com/2005/HEALTH/06/22/cancer.virus/index.html > 
  55. ↑ Gao, G.P.; Alvira, M.R.; Wang, L & andre (2002), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America bind 99 (18): 11854-9, PMID 12192090 
  56. ↑ 12 Halbert , C.L.; Allen, JM & Miller, AD (2001), Adeno-associerede virus type 6 (AAV6) vektorer medierer effektiv transduktion af luftvejsepitelceller i muselunger sammenlignet med AAV2 vektorer, Journal of virology. (J Virol) Jul; (): T. 75 (14): 6615-24, PMID 11413329 
  57. ↑ 1 2 Rabinowitz, JE; Bowles, D.E.; Faust, SM & andre (2004), Cross-dressing the virion: transcapsidering af adeno-associerede virusserotyper definerer funktionelt undergrupper, Journal of virology bind 78 (9): 4421-32, PMID 15078923 
  58. ↑ Chen, S; Kapturczak, M; Loiler, SA & andre (2005), Effektiv transduktion af vaskulære endotelceller med rekombinante adeno-associerede virus serotype 1 og 5 vektorer, Human genterapi bind 16 (2): 235-47, PMID 15761263 
  59. ↑ Kaludov, N; Brown, K.E.; Walters, RW og andre (2001), Adeno-associeret virus serotype 4 (AAV4) og AAV5 kræver begge sialinsyrebinding til hæmagglutination og effektiv transduktion, men adskiller sig i sialinsyrebindingsspecificitet, Journal of virology T. 75 (15): 6884- 93, PMID 11435568 
  60. ↑ Di Pasquale, G; Davidson, B.L.; Stein, CS og andre, Identifikation af PDGFR som en receptor for AAV-5-transduktion, Nature medicine T. 9 (10): 1306-12, PMID 14502277 
  61. ↑ Zaiss, A.K.; Liu, Q; Bowen, GP og andre (2002), Differential Activation of Innate Immune Responses by Adenovirus and Adeno-Associated Virus Vectors, Journal of Virology bind 76(9): 4580-90, PMID 11932423 
  62. ↑ 1 2 Zaiss, AK & Muruve, DA (2005), Immunresponser på adeno-associerede virusvektorer, Current Gene Therapy bind 5 (3): 323-31, PMID 15975009 
  63. ↑ Høj, K.A.; Mannos, CS; Pierce, GF & Others (2006), Succesfuld transduktion af lever i hæmofili af AAV-faktor IX og begrænsninger pålagt af værtens immunrespons, Nature Medicine bind 12 (3): 342-47, PMID 16474400 
  64. ↑ Høj, K.A.; Sabatino, D.E.; Mingozzi, F & Others (2005), Identifikation af muse-AAV-kapsid-specifikke CD8+ T-celleepitoper, Molekylær terapi T. 12 (6): 1023-33, PMID 16263332 
  65. ↑ Rohr, U.P.; Kronenwett, R; Grimm, D & andre (2002), Primære humane celler adskiller sig i deres modtagelighed for rAAV-2-medieret genoverførsel og varighed af reportergenekspression, Journal of virological methods bind 105 (2): 265-75, PMID 12270659 
  66. ↑ 1 2 Matsushita, T; Elliger, S; Elliger, C & andre (1998), Adeno-associerede virusvektorer kan effektivt produceres uden hjælpervirus, Genterapi bind 5 (7): 938-45, PMID 9813665 
  67. ↑ Myers, M.W.; Laughlin, CA; Jay, FT & andre (1980), Adenovirus-hjælperfunktion til vækst af adeno-associeret virus: virkning af temperaturfølsomme mutationer i adenovirus tidlig genregion 2, Journal of virology bind 35 (1): 65-75, PMID 6251278 
  68. ↑ Handa, H & Carter, BJ (1979), Adeno-associerede virus-DNA-replikationskomplekser i herpes simplex-virus eller adenovirus-inficerede celler, The Journal of biological chemistry T. 254 (14): 6603-10, PMID 221504 
  69. ↑ Yalkinoglu, A.O.; Heilbronn, R; Bürkle, A & andre (1988), DNA-amplifikation af adeno-associeret virus som en reaktion på cellulær genotoksisk stress, Cancer research bind 48 (11): 3123-9, PMID 2835153 
  70. ↑ Yakobson, B; Koch, T & Winocour, E (1987), Replikation af adeno-associeret virus i synkroniserede celler uden tilføjelse af et hjælpervirus, Journal of virology T. 61 (4): 972-81, PMID 3029431 
  71. ↑ Yakobson, B; Hrynko, T.A.; Peak, MJ & Winocour, E (1989), Replikation af adeno-associeret virus i celler bestrålet med UV-lys ved 254 nm, Journal of virology bind 63 (3): 1023-30, PMID 2536816 
  72. ↑ Duan, D; Sharma, P; Yang, J & andre (1998), Cirkulære mellemprodukter af rekombinant adeno-associeret virus har definerede strukturelle karakteristika, der er ansvarlige for langsigtet episomal persistens i muskelvæv, Journal of virology bind 72 (11): 8568-77, PMID 9765395 


Litteratur

  • Shakhbazov A.V., Severin I.N., Goncharova N.V., Grinev V.V., Kosmacheva S.M., Potapnev M.P. Virale vektorer til stabil transduktion af humane mesenkymale stamceller: systemer baseret på adeno-associerede vira og lentivirus // Celleteknologier i biologi og medicin. - 2008. - T. 4 . - S. 216-218 .