Protein elektroforese

Proteinelektroforese  er en metode til at adskille en blanding af proteiner i fraktioner eller individuelle proteiner, baseret på bevægelsen af ​​ladede proteinmakromolekyler med forskellige molekylvægte i et stationært elektrisk felt . Proteinelektroforese bruges både til at analysere komponenterne i en blanding af proteiner og til at opnå et homogent protein. Den mest almindelige variant af proteinelektroforetisk analyse er Laemmli polyacrylamidgelelektroforese [ [2] [3] .

Varianter af proteinelektroforesemetoden

Der er mange varianter og modifikationer af denne metode, der bruges (eller blev brugt i visse perioder i udviklingen af ​​biokemi og molekylærbiologi ) på forskellige områder [3] :

Proteinelektroforese er også underopdelt i en-dimensionel og to-dimensionel (2D) elektroforese [6] , præparativ og analytisk, samt naturlig proteinelektroforese og elektroforese i nærværelse af et detergent (under denaturerende forhold). En variation af elektroforesemetoden er isoelektrisk fokusering og isotachoforese . I tilfælde af at bruge immunologiske metoder til at påvise separerede proteiner, taler de om immunelektroforese .

Afhængigt af designet af det elektroforetiske apparat skelnes vandret og lodret proteinelektroforese.

Historie og applikationer

Efter de første eksperimenter med elektroforese, udført i flere laboratorier i 1930'erne og 1940'erne, herunder pioneren inden for elektroforese, nobelpristageren Arne Tiselius [7] , begyndte betydelige fremskridt i den videre udvikling og anvendelse af denne metode til proteinseparation i 1955 med udviklingen af ​​zonal stivelsesgelelektroforese af Oliver Smithies , senere også nobelprismodtager [4] [8] . Metoden blev forbedret [9] [10] og blev meget brugt i eksperimentel biokemi og molekylærbiologi.

I 1959 blev metoden til proteinelektroforese i PAAG foreslået [5] , i 1962 - metoden til diskelektroforese [11] , i 1969 - brugen af ​​denaturerende midler ( SDS ) [12] . I 1970 forbedrede Laemmli elektroforese i PAAG betydeligt ved at adskille 28 proteinkomponenter fra bakteriofag T4 [2] . I 1975 dukkede todimensionel (2D) elektroforese op [6] .

Proteinelektroforese har fundet bred anvendelse i biologisk forskning, både fundamental [2] [4] [13] og anvendt [14] [15] [16] [17] [18] . En række varianter af metoden er stadig i brug i dag; for eksempel er 2D elektroforese en af ​​metoderne til at studere proteomet i proteomik [19] .

Se også

Noter

  1. ↑ Schägger H. , von Jagow G. Tricin-natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese til adskillelse af proteiner i området fra 1 til 100 kDa  // Analytical Biochemistry  : journal  . - Orlando, FL , USA : Academic Press , 1987. - Vol. 166, nr. 2 . - S. 368-379. — ISSN 0003-2697 . — PMID 2449095 .  (Dato for adgang: 27. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 13. oktober 2020. Arkiveret fra originalen 6. april 2018. 
  2. ↑ 1 2 3 Laemmli UK . Spaltning af strukturelle proteiner under samlingen af ​​hovedet af bakteriofag T4  (engelsk)  // Nature  : journal. - London , Storbritannien : Nature Publishing Group , 1970. - Vol. 227, nr. 5259 . - S. 680-685. — ISSN 1476-4687 . - doi : 10.1038/227680a0 . — PMID 5432063 . Arkiveret fra originalen den 27. februar 2015.  (Få adgang: 27. februar 2015)
  3. ↑ 1 2 Osterman L. A. Metoder til undersøgelse af proteiner og nukleinsyrer: elektroforese og ultracentrifugering (praktisk vejledning). — M .: Nauka , 1981. — 288 s.
  4. ↑ 1 2 3 Smithies O. Zoneelektroforese i stivelsesgeler: gruppevariationer i serumproteinerne hos normale menneskelige voksne  (engelsk)  // The Biochemical Journal  : journal. — London, Storbritannien: Biochemical Society ; Portland Press , 1955. Vol. 61, nr. 4 . - s. 629-641. — ISSN 0264-6021 . — PMID 13276348 . Arkiveret fra originalen den 27. februar 2015.  (Få adgang: 27. februar 2015)
  5. ↑ 1 2 Raymond S., Weintraub L. Akrylamidgel som et støttemedium til zoneelektroforese  // Science  :  journal. - Washington, DC , USA: American Association for the Advancement of Science , 1959. - Vol. 130, nr. 3377 . - S. 711. - ISSN 0036-8075 . — PMID 14436634 .  (Dato for adgang: 27. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 13. oktober 2020. Arkiveret fra originalen 6. oktober 2017. 
  6. ↑ 1 2 O'Farrell PH Højopløsnings todimensionel elektroforese af proteiner  (engelsk)  // The Journal of Biological Chemistry: tidsskrift. - Baltimore, MD , USA: American Society for Biochemistry and Molecular Biology , 1975. - Vol. 250, nr. 10 . - S. 4007-4021. — ISSN 4406-4412 . — PMID 236308 .  (Dato for adgang: 27. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 27. februar 2015. Arkiveret fra originalen 18. januar 2020. 
  7. ↑ Tiselius A. Et nyt apparat til elektroforetisk analyse af kolloide blandinger  (engelsk)  // Transactions of the Faraday Society  : journal. - London, Storbritannien: Faraday Society , 1937. - Vol. 33. - S. 524-531. — ISSN 0014-7672 . - doi : 10.1039/TF9373300524 .  (Få adgang: 28. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 13. oktober 2020. Arkiveret fra originalen 10. august 2020. 
  8. ↑ Elektroforese: Teori, metoder og anvendelser / Red. af M. Bier. — 3. oplag udg. - New York, NY , USA: Academic Press, 1964. - S. 225. - 563 s.  (Engelsk)  (Dato for adgang: 27. februar 2015) Arkiveret kopi (utilgængeligt link) . Hentet 27. februar 2015. Arkiveret fra originalen 5. oktober 2017. 
  9. ↑ Smithies O. En forbedret procedure for stivelse-gelelektroforese: yderligere variationer i serumproteinerne hos normale individer  //  The Biochemical Journal : journal. — London, Storbritannien: Biochemical Society; Portland Press, 1959. Vol. 71, nr. 3 . - S. 585-587. — ISSN 0264-6021 . — PMID 13638269 . Arkiveret fra originalen den 27. februar 2015.  (Få adgang: 27. februar 2015)
  10. ↑ Gahne B. Undersøgelser om nedarvning af elektroforetiske former for transferriner, albuminer, præalbuminer og plasmaesteraser fra heste  // Genetics  :  journal. - Baltimore, MD, USA: Genetics Society of America , 1966. - Vol. 53, nr. 4 . - s. 681-694. — ISSN 0016-6731 . — PMID 5960258 .  (Dato for adgang: 27. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 27. februar 2015. Arkiveret fra originalen 5. oktober 2017. 
  11. ↑ Ornstein L., Davis BJ Disc Electrophoresis. — Rochester, NY , USA: Destillation Products Industries, Eastman Kodak Co. , 1962.  (engelsk)
  12. ↑ Weber K., Osborn M. Pålideligheden af ​​molekylvægtsbestemmelser ved dodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese  (engelsk)  // The Journal of Biological Chemistry : tidsskrift. - Baltimore, MD, USA: American Society for Biochemistry and Molecular Biology, 1969. - Vol. 244, nr. 16 . - P. 4406-4412. — ISSN 0021-9258 . — PMID 5806584 .  (Dato for adgang: 27. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 13. oktober 2020. Arkiveret fra originalen 18. januar 2020. 
  13. ↑ Hunter RL, Merkert CL Histokemisk demonstration af enzymer adskilt ved zoneelektroforese i stivelsesgeler // Videnskab. - 1957. - Bd. 125. - S. 1294-1295. (Engelsk)
  14. ↑ Baker CMA Molekylær genetik af fugleproteiner. IX. Interspecifik og intraspecifik variation af æggehvideproteiner af slægten Gallus  (engelsk)  // Genetics : journal. - Baltimore, MD, USA: Genetics Society of America, 1968. - Vol. 58, nr. 2 . - S. 211-226. — ISSN 0016-6731 . — PMID 5960258 .  (Dato for adgang: 27. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 27. februar 2015. Arkiveret fra originalen 6. oktober 2017. 
  15. ↑ Baker CMA, Croizier G., Stratil A., Manwell C. Identitet og nomenklatur for nogle proteinpolymorfismer af hønseæg og -sera  //  Advances in Genetics: journal. - New York, NY, USA: Academic Press, 1970. - Vol. 15. - S. 147-174. — ISSN 0065-2660 . — PMID 4936422 .  (Dato for adgang: 27. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 13. oktober 2020. Arkiveret fra originalen 13. oktober 2020. 
  16. ↑ Romanov MN (1988-06-07). "Undersøgelse af genetisk polymorfi af ovoproteiner i nogle æg- og kødæg-type linjer af kyllinger" . abstracts . 4. symposium for unge fjerkræforskere. Krakow , Polen : Verdens fjerkrævidenskabsforening, polsk afdeling. s. 10.OCLC 899128291.  _ _ Hentet 2020-10-18 . (Engelsk)
  17. ↑ Romanov M. N. (1994-01-27). "Elektroforetisk undersøgelse af ovoprotein loci i æghønepopulationer under udviklingen af ​​Highsex Brown Cross" . Tez. rapport _ I praktikant. konf. om Molecular Genetic Markers of Animals, Kiev , 27.-29. januar 1994. Kiev, Ukraine : Ukr. acad. agrarisk Sciences , Institut for Husdyravl og Genetik, Institut for Agroøkologi og Bioteknologi; landbrugsvidenskab. pp. 34-35. OCLC  899128337 . TsNShB , TRN: RU9815007X . Hentet 2015-02-28 . Arkiveret fra originalen den 6. oktober 2017.
  18. ↑ Romanov M.N.; Chernikov V. F. (1994-01-27). "Polymorfe æggern som markører for intrapopulationsvariabilitet hos sorthovedet måger" . Tez. rapport _ I praktikant. konf. om Molecular Genetic Markers of Animals, Kyiv, 27.-29. januar 1994. Kyiv, Ukraine: Ukr. acad. agrarisk Videnskaber, Institut for Husdyravl og Genetik, Institut for Agroøkologi og Bioteknologi; landbrugsvidenskab. pp. 35-36. OCLC  899128260 . Hentet 2015-02-28 . Forældet parameter brugt |coauthors=( hjælp ) Arkiveret fra originalen den 8. august 2020.
  19. ↑ Komatsu S., Kojima K., Suzuki K., Ozaki K., Higo K. Rice Proteome Database baseret på todimensionel polyacrylamidgelelektroforese: dens status i 2003  // Nucleic Acids Research  : journal  . - Oxford , Storbritannien: Oxford University Press , 2004. - Vol. 32, nr. Database problem . - P. D388-D392. — ISSN 0305-1048 . — PMID 14681440 .  (Få adgang: 28. februar 2015) Arkiveret kopi (link ikke tilgængeligt) . Hentet 13. oktober 2020. Arkiveret fra originalen 3. juni 2018. 

Litteratur

Links