Spermogram (fra andet græsk σπέρμα - frø og γράμμα - rekord) er en analyse af ejakulat (sperm), der bruges i medicin til at bestemme en mands frugtbarhed og identificere mulige sygdomme i det reproduktive system. Et spermogram er ordineret til klager fra et ægtepar over infertilitet , et spermogram er også indiceret til sæddonorer og personer, der planlægger spermkryokonservering .
Hovedkomponenten i spermogrammet er den mikroskopiske analyse af ejakulatet, hvor karakteristikaene for de cellulære elementer i sæden bestemmes, nemlig: antallet af spermatozoer, sædmotilitet, morfologiske egenskaber af spermatozoer, antallet og typer af leukocytter, antallet og typer af umodne celler af spermatogenese osv. Derudover makroskopiske ejakulatparametre: sædvolumen, farve, fortætningstid og ejakulatviskositet, pH. Nogle gange udføres en yderligere biokemisk analyse af ejakulatet, hvor indholdet af fructose , zink , alfa-glucosidase , L-carnitin i sæden oftest undersøges .
Idéer om, hvilke egenskaber en fertil mands ejakulat har ændret sig over tid. Med stigningen i kvaliteten og kvantiteten af undersøgelser inden for sektionen af mandlig infertilitet bliver data om spermatogenese revideret og forfinet. Forslagene fra forskellige forfattere om normerne for ejakulatvolumen, koncentration og motilitet af spermatozoer er præsenteret i tabellen.
| Forfatter | År | Volumen, ml | Koncentration, mln/ml | Mobilitet, % |
|---|---|---|---|---|
| Davis | 1943 | fire | 60 | 80 |
| Sharren | 1972 | 2 | 40 | 70 |
| Eliasson | 1981 | 2 | tyve | halvtreds |
| Bustos-Obregon | 1981 | 1.5 | tyve | 40 |
| Van Zyl | 1976 | 2 | ti | tredive |
| WHO standarder | 1999 | 2 | tyve | halvtreds |
| WHO standarder | 2010 | 1.5 | atten | 32 |
I USSR og på nuværende tidspunkt i Rusland er der ingen særlige dokumenter fra sundhedsministeriet, der fastlægger normerne for frugtbar ejakulation. Medicinske institutioner har ret til at vurdere ejakulatets fertilitet i henhold til deres egne standarder. Standarderne foreslået af Verdenssundhedsorganisationen (WHO) er meget populære blandt læger . Udbredelsen af WHO-standarder er så stor blandt læger, at disse standarder kan betragtes som almindeligt anerkendte på nuværende tidspunkt, og bogen "WHO Guidelines for the laboratory study of human ejaculate and the interaction of spermatozoa with cervical mucus" er den mest autoritative publikation. om reglerne for udførelse af spermogrammer.
Den seneste udgave af WHO-retningslinjerne for laboratorietestning af humant ejakulat og interaktion mellem sædceller og livmoderhalsslim (Cambridge University Press, 1999) foreslår følgende normative indikatorer for fertilt ejakulat:
| Indeks | Betyder |
|---|---|
| Bind | 2 ml eller mere |
| pH | 7.2 eller mere |
| Sperm koncentration | 20 millioner/ml eller mere |
| Samlet sædtal | 40 millioner eller mere |
| Spermmotilitet | 50 % eller mere i bevægelse (Kategori A+B) eller 25 % eller mere progressiv (Kategori A) inden for 60 minutter efter ejakulation |
| Sperm levedygtighed | 50 % eller mere i live |
| Leukocytkoncentration | mindre end 1 million/ml |
| Antisperm antistoffer | mindre end 50 % af ACAT-associerede spermatozoer påvist af MAR eller ImunnoBeat |
WHO giver ikke specifikke anbefalinger vedrørende normen for antallet af sædceller med normal morfologi, og påpeger, at undersøgelser af normative værdier for sædceller stadig er i gang.
I 2010 foretog WHO nye ændringer i referenceværdierne for ejakulatindikatorer, hvilket ændrede metoden til behandling og forskning. I den seneste, 5. udgave af "WHO laboratoriemanualen til undersøgelse og behandling af menneskelig sæd", normerne for antallet og bevægeligheden af sædceller, er antallet af normale former for sædceller blevet ændret. Så for eksempel er klassificeringen af bevægelige spermatozoer blevet afskaffet: ifølge grupperne a, b, c, d. I stedet foreslås en klassificering af spermatozoer med progressiv bevægelse, ikke-progressiv bevægelse og immobil.
Nedenfor er normerne for ejakulationsindikatorer i henhold til de seneste WHO-anbefalinger fra 2010:
| Indeks | Betyder |
|---|---|
| Ejakulationsvolumen, ml | 1,5 ml eller mere |
| Samlet antal spermatozoer, mio | 39 og derover |
| Spermkoncentration, million i 1 ml | 15 eller mere |
| Samlet sædmotilitet, % | 40 eller mere |
| Spermatozoer med progressiv bevægelse, % | 32 eller mere |
| Levedygtighed, % | 58 og derover |
| Morfologi: normale former, % | 4 eller flere |
Ejakulatet, der svarer til de accepterede normative værdier, kaldes normalt, og tilstanden af dette ejakulat betegnes med udtrykket "normospermi" eller "normozoospermi".
WHO foreslår følgende udtryk for at beskrive de patologiske tilstande af ejakulatet:
Udtrykkene "oligozoospermia", "asthenozoospermia" og "teratozoospermia" i nærvær af passende abnormiteter i ejakulatet kan kombineres til ét ord, for eksempel: "oligoasthenoteratozoospermia", "asthenoteratozoospermia" osv.
Derudover er følgende udtryk almindelige:
Nogle gange kan følgende udtryk findes:
Før de donerer sæd til analyse, rådes mænd til at afholde sig fra seksuel aktivitet og onani i 2-7 dage. Denne periode anbefales for at standardisere betingelserne for analysen, så du kan sammenligne resultaterne opnået i forskellige laboratorier . Det anbefales også normalt at undgå overdreven indtagelse af stærke alkoholiske drikke i 2-5 dage (selvom effekten af alkohol på sædkvaliteten i denne periode ikke er blevet vist). Også i flere dage før analysen bør besøg i saunaer , dampbade , termiske bade og andre rum med meget høje temperaturer undgås, da høje temperaturer reducerer sædmotiliteten.
Den mest almindelige måde at få sæd til analyse på er ved onani ; denne metode anbefales af WHO. Andre metoder har ulemper. Sådanne metoder omfatter: coitus interruptus og brug af et specielt medicinsk kondom uden smøring. Ejakulatet modtages i en skål, der tilbydes af den relevante medicinske institution. Som regel bruges specielle sterile kopper til at indsamle flydende biologiske sekreter ( urin , afføring ). Det er muligt at opnå ejakulat uden for en medicinsk facilitet med efterfølgende transport.
Normal sæd umiddelbart efter ejakulation er et koagulat eller blot en tyktflydende væske. Med tiden bliver sæden flydende. Denne tidsperiode omtales som "likvefaktionstiden". Normalt bliver ejakulatet flydende inden for 15-60 minutter. Hvis ejakulatet ikke bliver flydende inden for 1 time, så bliver det som regel slet ikke længere flydende.
Likvefaktion af ejakulatet bestemmes af den såkaldte "længde af tråden." Ejakulatet røres med en glas- eller plastikpind (pipette), og stokken hæves over ejakulatoverfladen; For at bestemme "trådens længde" i moderne medicin bruger de ofte frigivelse af ejakulat fra en 5 ml serologisk pipette. "Gevindlængde" karakteriserer parameteren "viskositet". Viskositet og udtyndingstid er relaterede parametre.
Viskositeten tildeles sæden af glykoproteinet semenogelin, som produceres i sædblærerne . Funktionerne af semenogelin er ikke fuldt ud kendt, det antages, at det binder til ligander på overfladen af spermatozoer og holder dem i en inaktiv tilstand. Under ejakulation blandes prostatajuice , som indeholder det såkaldte " prostataspecifikke antigen ", med spermatozoer og sædblærejuice . Dette proteolytiske enzym nedbryder semenogelin, hvilket resulterer i sædvæske og formodentlig gør spermatozoer aktive (sammen med andre faktorer). Ikke-likvefaktion af ejakulatet indikerer prostata dysfunktion.
Da den øgede viskositet af ejakulatet kan påvirke pålideligheden af mikroskopisk analyse, bør ejakulat, der ikke er blevet flydende inden for 1 time, kunstigt gøres flydende ved hjælp af proteolytiske enzymer (f.eks. farmakopétrypsin ) .
Ejakulatvolumenet måles sædvanligvis med en gradueret serologisk pipette (samtidig med at viskositeten bestemmes). I de fleste laboratorier betragtes et ejakulatvolumen på mindre end 2 ml som unormalt, tilstanden af et sådant ejakulat er karakteriseret som "oligospermi". Ejakulatets hovedvolumen er givet af saften fra sædblærerne (ca. to tredjedele af volumenet) og saften fra prostatakirtlen (ca. en tredjedel af volumenet). Insufficiens af ejakulatvolumen kan være forårsaget af retrograd ejakulation, dysfunktion, sædblærhypoplasi, prostatadysfunktion, hypogonadisme, obstruktion (helt eller delvist) af ejakulationskanalerne, en kort periode med afholdenhed fra seksuel aktivitet før donation af sæd til analyse.
Ejakulatets surhedsgrad bestemmes efter fortynding med indikatorpapir eller et pH-meter . WHO anbefaler en pH-værdi på mindst 7,2 som en normal indikator. Ejakulatet hos de fleste mænd har en pH på 7,8-8,0.
Farven på ejakulatet i moderne medicin har ikke en seriøs diagnostisk værdi; dets fiksering på spermogramemnet er en hyldest til traditionen. Ifølge traditionelle ideer har en normal ejakulat en "hvidlig-grålig" farve, nogle gange er den karakteriseret som "opaliserende", "overskyet hvid". Et klart ejakulat kan (men ikke nødvendigvis) indikere et lavt sædtal i ejakulatet. Gullig eller lyserød ejakulat er nogle gange forbundet med hæmospermi. Det skal bemærkes, at mikroskopisk analyse nøjagtigt bestemmer antallet af spermatozoer og røde blodlegemer i sæden, så der er ingen grund til at fiksere farven på ejakulatet.
Nogle laboratorier fikser lugten af ejakulat. Den er karakteriseret som "specifik" (i nogle forældede medicinske bøger (f.eks. i "WHO Manual ...", 1991) sammenlignes den med duften af kastanjeblomster). Lugten af ejakulat kommer fra stoffet spermin, der udskilles af prostatakirtlen. Funktionerne af spermin er ukendte. Nogle androloger bruger lugten af ejakulat til at bedømme prostatakirtlens sekretoriske aktivitet, men den diagnostiske værdi af denne tilgang er ukendt.
Antallet af spermatozoer er udtrykt i relative termer ( koncentration eller mængde i 1 ml ejakulat) og i absolutte tal (samlet mængde i ejakulat ). Som regel bruges tællekamre til at bestemme antallet af spermatozoer - enheder, der giver dig mulighed for at observere spermatozoer i et bestemt volumen væske under et mikroskop (dette giver dig mulighed for at bestemme antallet af spermatozoer i 1 ml, det vil sige koncentrationen ved aritmetiske operationer). For at tælle spermatozoer bruges enten tællekamre for blodceller - hemacytomerer (" Goryaevs kammer ", "Neubauer" kammer) eller specielle tællekamre for sæd ("Maklers kammer" osv.). Hurtige koncentrationsmetoder findes også , såsom at tælle spermatozoer på et objektglas. Hvis en dråbe på 10 µl sæd er dækket med et 22×22 dækglas, så vil antallet af spermatozoer i et mikroskops synsfelt ved en forstørrelse på 400 gange være omtrent lig med antallet af millioner spermatozoer i 1 ml ejakulat. Der findes edb-systemer til at bestemme koncentrationen af sædceller - de såkaldte sædanalysatorer. En sådan enhed er et mikroskop med et installeret videokamera og et billedevalueringssystem.
Med alle metoder til bestemmelse af antallet af spermatozoer opnås først koncentrationsdata. Derefter, ved at gange koncentrationen med volumen, opnås data om det samlede antal spermatozoer i ejakulatet. Ifølge WHO har et normalt ejakulat mindst 20 millioner sædceller pr. 1 ml volumen, eller mindst 40 millioner i samlet volumen. Ejakulatets tilstand med færre spermatozoer karakteriseres som "oligozoospermi".
Nogle gange er antallet af sædceller så lille, at det ikke kan udtrykkes i en bestemt koncentration (for eksempel så lægen kun nogle få sædceller efter at have undersøgt mere end én prøve af ejakulat). I dette tilfælde taler man om "enkelte spermatozoer i synsfeltet", "enkelte spermatozoer på præparatet" eller "enkelte spermatozoer i ejakulatet". Nogle gange kan sædceller kun påvises ved at centrifugere sæden og undersøge sedimentet med et mikroskop.
I henhold til motiliteten er spermatozoer opdelt i 4 kategorier: A, B, C og D:
| Kategori | Navn | Bevægelseskarakteristik |
|---|---|---|
| Kategori A | Progressivt aktiv | Bevæg dig i en lige linje med en hastighed på mindst 25 mikron/s (inden for to sekunder dækker de en afstand svarende til deres længde) |
| Kategori B | Bevæger sig gradvist langsomt | Bevæg dig i en lige linje med en hastighed på mindre end 25 µm/s |
| Kategori C | Ikke-progressiv bevægelig | De bevæger sig enten indirekte eller blot flytter på plads |
| Kategori D | ubevægelig | ubevægelig |
Kategori A og B sædceller menes at kunne nå ægget (kategori B sædceller kan nogle gange øges i hastighed efter kapacitation i skeden og livmoderhalsen). Andelen af spermatozoer af forskellige kategorier af motilitet bestemmes enten på et objektglas "ved øjet" eller i et tællekammer eller ved hjælp af en computerstyret spermanalysator.
Ifølge WHO-forslaget anses ejakulat som normalt, hvis mindst én af to betingelser er opfyldt: 1) hvis andelen af sædceller i mobilitetskategori A er ikke mindre end 25 %, 2) eller hvis andelen af sædceller i mobilitetskategori A og B i summen er ikke mindre end 50%. Den tilstand af ejakulatet, der ikke opfylder disse betingelser, er karakteriseret som "asthenozoospermi".
Analyse af den morfologiske normalitet af spermatozoer, eller blot "spermmorfologi" udføres ved hjælp af et mikroskop. Laboratorielægen bestemmer andelen af spermatozoer, hvis udseende svarer til normen, og andelen af spermatozoer med unormal morfologi. Til analyse anvendes enten hjemmehørende sperm, eller en udstrygning af sperm farvet på glas fremstilles. Udstrygningen er farvet med histologiske farvestoffer, i det enkleste tilfælde med hæmatoxylin , i mere komplekse tilfælde udføres kompleks farvning i henhold til metoderne fra Schorr, Papanicolaou eller Romanovsky-Giemsa .
Sæd indeholder altid et stort antal unormale spermatozoer. Unormal morfologi kan relatere til hovedets struktur (unormal form, størrelse, fravær eller reduceret akrosom ), strukturen af halsen og midterdelen (krumning, unormal størrelse), flagelum (krumning, fravær eller multiple flageller, størrelse). WHO giver ikke entydige anbefalinger om, hvor stor en procentdel af unormale sædceller, der er acceptable i normal sæd. I 1992-udgaven af "Guidelines ..." blev der lagt vægt på anbefalingen om at studere morfologien i naturligt sædafgang ved brug af "lysfelt"-optik; med denne metode bør andelen af unormale spermatozoer ikke overstige 50 % i et normalt ejakulat. 1999-udgaven af WHO-retningslinjerne understregede anbefalingen om at undersøge morfologi i naturligt ejakulat ved brug af "fasekontrast"-optik; med denne metode bør andelen af unormale spermatozoer ikke overstige 70% i et normalt ejakulat. Men samme publikation anbefaler også, at man bruger de såkaldte "Strikte Kruger-kriterier" til at undersøge morfologien på en farvet spermudstrygning. Ifølge disse kriterier (gælder kun for udstrygningen) bør andelen af unormale spermatozoer ikke overstige 85 %. Etableringen af normer for antallet af unormale spermatozoer afhænger således af metoden til vurdering af spermatozoers morfologi. Den mest nøjagtige metode er undersøgelsen af en farvet udstrygning. Ejakulatets tilstand, som ikke opfylder standarderne for sædmorfologi, karakteriseres som "teratozoospermi".
Levedygtigheden af spermatozoer er karakteriseret ved andelen af levende spermatozoer. Motil sperm er altid i live. En ubevægelig sæd kan enten være levende, men med nedsatte bevægelsesfunktioner, eller død. WHO foreslår som en levedygtighedsstandard - mindst 50% af den samlede levedygtighed. Så hvis andelen af bevægelige spermatozoer (kategori A, B, C) er 50 % eller mere, er der ikke behov for at udføre en særlig levedygtighedsundersøgelse. Denne parameter giver mening at undersøge med asthenozoospermi. De to mest almindelige metoder til at vurdere levedygtigheden af sædceller. Begge metoder er baseret på kendsgerningen om krænkelse af integriteten af cellens ydre membran kort efter dens død:
Afrundede eller runde celler kaldes ikke-flagellerede cellulære elementer af sædceller. Med andre ord er afrundede celler alt, hvad der ikke er spermatozoer. Dette kollektive koncept omfatter to grupper af celler af forskellig oprindelse: leukocytter og de såkaldte "umodne celler af spermatogenese". Konceptet med "afrundede celler" dukkede op, fordi det er umuligt at skelne leukocytter fra umodne spermatogeneseceller i naturligt ejakulat ved hjælp af lysmikroskopi. Celler, der er atypiske for ejakulatet (erythrocytter, epitelceller i vas deferens osv.) klassificeres ikke som "runde celler".
Den diagnostiske betydning af parameteren "antal afrundede celler" er ikke klar. Tidligere foreslog WHO en norm på højst 5 millioner / ml, hvilket begrundede det med det faktum, at hvis antallet af afrundede celler overstiger 5 millioner / ml, er det sandsynligt, at indholdet af leukocytter vil overstige normen (ikke mere end 1 million / ml). Efterfølgende blev normen "ikke mere end 5 millioner / ml" annulleret.
Umodne celler af spermatogenese kaldes celler af den spermatogene serie, det vil sige forstadier til spermatozoer. Disse omfatter spermatogonia, spermatocytter af første og anden orden og spermatider (se spermatogenese ). Ejakulatet indeholder altid umodne spermatogeneseceller, deres antal varierer meget (normalt 2-5 millioner / ml, men kan nå flere titusinder af millioner i 1 ml). Tilsyneladende har antallet af umodne spermatogeneseceller ingen diagnostisk værdi.
Ifølge et almindeligt synspunkt kan et øget indhold af leukocytter i sæd indikere tilstedeværelsen af inflammatoriske processer i de accessoriske kønskirtler (prostata, sædblærer). Ifølge WHO har et normalt ejakulat ikke mere end 1 million leukocytter pr. 1 ml. Ejakulatets tilstand med et stort antal leukocytter karakteriseres som "leukocytospermi".
Langt de fleste leukocytter i sæden er repræsenteret af neutrofile segmenterede granulocytter . De resterende typer af leukocytter i normalt ejakulat er sjældne, så metoderne til påvisning af leukocytter er rettet mod at identificere segmenterede granulocytter. I naturligt ufarvet ejakulat er det umuligt pålideligt at skelne granulocytter fra umodne spermatogeneseceller. Den enkleste metode til påvisning af granulocytter er mikroskopi af en farvet spermudstrygning. Det er nok at behandle spermudstrygningen med ethvert farvestof, der pletter kernen, for eksempel hæmatoxylin . Runde celler med segmenterede kerner er defineret som granulocytter. Der findes også metoder til farvning af granulocytter ved hjælp af den såkaldte "peroxidase-test" - der tilsættes et farveløst substrat til sæden, som spaltes af peroxidase til et farvet produkt. Granulocytter indeholder peroxidase , nedbryder substratet og farves gult.
Påvisningen af leukocytter er også vigtig ved diagnosticering af årsagerne til azoospermi . Obstruktiv azoospermi skyldes obstruktion af vas deferens, sekretorisk azoospermi skyldes undertrykt spermatogenese. Med sekretorisk azoospermi er umodne spermatogeneseceller normalt til stede i ejakulatet, med obstruktiv azoospermi er umodne spermatogeneseceller fraværende (på grund af obstruktion af kønsorganerne). Hvis med azoospermi alle de runde celler i ejakulatet bestemmes som leukocytter, så er sandsynligheden for obstruktiv azoospermi høj.
Antisperm antistoffer [1] (ASAT) kaldes antistoffer mod antigener fra spermatozoer. Sådanne antistoffer kan produceres af både en mands krop og en kvindes krop. Årsagen til udseendet er immunsystemets kontakt med sæd ved sygdomme i kønsorganerne. Antisperm antistoffer kan forårsage infertilitet af en immun karakter. Ved at binde sig til antigener på spermatozoernes hoved kan antisperm-antistoffer blokere bindingsreceptorerne i sædcellerne og ægget (spermatozoen kan ikke binde sig til ægcellemembranen for at starte den akrosomale reaktion). Ved at binde sig til antigener på spermatozoernes hale kan ASAT forstyrre sædcellens bevægelse. ACAT forårsager øget DNA-fragmentering, patogenesen af patospermi i immun infertilitet er forbundet med oxidativt stress.
Et almindeligt tegn på tilstedeværelsen af ASAT i sæden er den såkaldte "spermagglutination" - specifik limning af spermatozoer, klæbning af spermatozoer til hinanden. Spermagglutination bør skelnes fra den såkaldte "spermaggregation" - uspecifik agglutination på grund af tilstedeværelsen af slim i sæden. Spermagregation er en variant af normen og har ingen klinisk betydning. Under spermagglutination danner bevægelige spermatozoer små bindingsgrupper - flere spermatozoer klæber sammen med de samme dele af deres celle - "hoved mod hoved" eller "hale mod hale" eller "hals mod hals". Disse bindingsgrupper omtales nogle gange som "rosetter". Som regel er antallet af rosetter lille - en til flere synsfelter i mikroskopet, men den kan også være massiv. Afrundede celler deltager ikke i agglutination og indgår ikke i "rosetterne". Under aggregering danner spermatozoer store klynger (fra tiere til hundreder). Sådanne klynger danner ofte en "streng"-form og inkluderer afrundede celler.
Der findes immunkemiske metoder til bestemmelse af ASAT. Den mest almindelige i moderne laboratoriepraksis er MAR-metoden (Mixed Antiglobulin Reaction). I denne metode tilsættes en dråbe af en suspension af silikonemikropartikler bundet til kaninantistoffer mod humane antistoffer til en dråbe sæd på et objektglas. Sådanne partikler binder til humane antistoffer. Hvis ASAT er til stede i sæden, så klæber partiklerne til spermatozoerne. I dette tilfælde observeres spermatozoer med vedhæftede mikropartikler i mikroskopets synsfelt. Hvis antallet af spermatozoer, der bærer mikropartikler, overstiger 50%, konkluderes der om tilstedeværelsen af "antisperm-antistoffer" i sæden.