Elektroforese i polyakrylamidgel

Polyacrylamid-gelelektroforese ( forkortet PAAG-elektroforese, PAAG-elektroforese; engelsk  PAGE, Polyacrylamide Gel Electrophoresis ) er en metode til molekylærbiologi og biokemi, der bruges til at adskille proteiner og nukleinsyrer , baseret på bevægelse af ladede biologiske makromolekyler i et konstant elektrisk felt . Adskillelse i en polyakrylamidgel sker på grund af forskelle i ladningen af ​​molekylerne, der adskilles og forskelle i molekylvægtesamt molekylernes konfiguration. Del den såkaldte. ikke-denaturerende eller nativ PAAG-elektroforese (hvor de biologiske makromolekyler, der skal adskilles, forbliver i den native tilstand under elektroforese) og denaturerende PAAG-elektroforese (hvor prøverne er præ- denatureret , i tilfælde af nukleinsyrer, kort opvarmning af prøven med formamid eller glyoxal anvendes til proteindenaturering , normalt ved at koge prøven i en buffer indeholdende et stærkt ionisk detergent (normalt natriumdodecylsulfat ) og et middel, der ødelægger proteinets kvaternære struktur på grund af ødelæggelsen af ​​disulfidbroer mellem protein kugler og inde i polypeptidkæden - beta-mercaptoethanol ). I processen med denaturering af PAAG-elektroforese bevares molekyler i en denatureret tilstand på grund af tilstedeværelsen af ​​kaotrope midler i gelen (sædvanligvis urinstof ) i tilfælde af PAAG-elektroforese af nukleinsyrer og proteiner og tilstedeværelsen af ​​ionisk (f.eks. natrium) dodecylsulfat, cetyltrimethylammoniumbromid ) og ikke-ioniske (f.eks . tween-20 ) detergenter.

Se også

Noter

  1. UK Laemmli. Spaltning af strukturelle proteiner under samlingen af ​​lederen af ​​Bacteriophage T4. Nature, 1970; V.227, s. 680-685