Et hybridom er en hybridcellelinje opnået ved fusion af to typer celler: antistofdannende B -lymfocytter opnået fra milten fra et immuniseret dyr (oftest en mus) og myelomtumorceller . Cellefusion udføres ved hjælp af et membranforstyrrende middel såsom polyethylenglycol eller Sendai -virus . Eftersom myelomcancerceller er "udødelige", det vil sige i stand til at dele sig et stort antal gange, efter fusion og passende selektion , kan et hybridom, der producerer monoklonale antistoffer mod antigenet, opretholdes i lang tid. I 1984 modtog Milstein , Köhler og Jerne Nobelprisen i fysiologi eller medicin for opdagelsen af princippet om at opnå monoklonale antistoffer .
Laboratoriedyr ( pattedyr såsom mus) immuniseres, normalt ved flere injektioner af antigen over en periode på 1-2 måneder. Celler opnås derefter fra milten, hvorfra lymfocytter isoleres. De er fusioneret med myelomceller, som er valgt til ikke at producere antistoffer alene og ikke til at have hypoxanthin-guanin-phosphoribosyltransferase- genet (HGPT), hvilket gør det modtageligt for selektionsmidlet HAT (se nedenfor). Cellefusion udføres ved hjælp af et membranforstyrrende middel såsom polyethylenglycol eller Sendai-virus .
Efter fusion holdes cellerne i 10-14 dage i et medium indeholdende HAT ( hypoxanthin , aminopterin og thymidin ). Aminopterin blokerer nukleotidsyntesen, så maternelle myelomceller dør. I modsætning til myelom overlever hybridceller og B-lymfocytter med HHPT-genet på grund af brugen af hypoxanthin som en kilde til puriner , men levetiden for almindelige lymfocytter er begrænset, og kun hybridomceller forbliver i kultur efter et par uger. Da ikke alle af dem er dannet ved fusion af myelom med lymfocytter, der producerer de ønskede antistoffer, opdeles cellerne i linjer, som holdes i separate celler af 96-brønds plader. Dernæst bestemmes antistoffer i mediet over cellerne, og cellelinjer, der ikke producerer antistoffer eller ikke formerer sig hurtigt nok, kasseres. Med en tilstrækkelig god fortynding af cellesuspensionen kommer der ikke mere end én hybridcelle i én brønd, men for at sikre kulturens kvalitet og stabilitet kan de udvalgte cellelinjer klones igen, så antistoffer produceres af efterkommere af én hybrid celle, det vil sige, at de er monoklonale [1] .
Den klonede hybridomkultur subdyrkes derefter fra brønden på 96-brøndspladen til større beholdere til formering, opbevaring i flydende nitrogen og opnåelse af flere antistoffer til yderligere undersøgelser. Fra dyrkningsmediet kan opnås fra 1 til 60 µg/ml monoklonale antistoffer. En større mængde kan opnås ved at indsprøjte cellesuspensionen i bughulen hos mus, hvor hybridomet formerer sig som maternelle myelomkræftceller og udskiller antistoffer i den intrakavitære væske med dannelse af ascites (væskeophobning i bughulen).