Fragment af Klenov

Den aktuelle version af siden er endnu ikke blevet gennemgået af erfarne bidragydere og kan afvige væsentligt fra den version , der blev gennemgået den 26. december 2015; checks kræver 2 redigeringer .

Klenow - fragmentet er et  stort proteinfragment, der er et resultat af den enzymatiske spaltning af DNA-polymerase I fra Escherichia coli af proteasen subtilisin. Klenow-fragmentet blev først beskrevet i 1970 og havde 5' → 3'-polymeraseaktivitet i kombination med 3' → 5' exonukleaseaktivitet (korrektor), men havde ikke 5' → 3' exonukleaseaktivitet [1] .

Andre mindre fragmenter, der stammer fra enzymatisk fordøjelse, kunne have 5' → 3'-exonukleaseaktivitet, men manglede de to aktiviteter, der er karakteristiske for Klenow-fragmentet.

Klenow-fragmentet blev brugt som en DNA-polymerase i de første metoder til polymerasekædereaktion [2] og blev først efter nogen tid erstattet af en termostabil Taq-polymerase [3] .

Bruges i øjeblikket til DNA-mærkning ("udfyld" 3' korte ender med "tilfældige hexamerer"), til DNA-sekventering ved Sanger-metoden og til DNA- syntese af anden streng.

Noter

  1. ↑ Klenow H og Henningsen I. Selektiv eliminering af exonukleaseaktiviteten af ​​deoxyribonukleinsyrepolymerase fra Escherichia coli B af Limited Proteolysis   // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America  : journal. - 1970. - Bd. 65 . - S. 168-175 . - doi : 10.1073/pnas.65.1.168 . — PMID 4905667 .
  2. ↑ Saiki R.K. et al. Enzymatisk amplifikation af β-globin genomiske sekvenser og restriktionsstedsanalyse til diagnose af seglcelleanæmi  (engelsk)  // Science : journal. - 1985. - Bd. 230 . - S. 1350-1354 . - doi : 10.1126/science.2999980 . — PMID 2999980 .
  3. ↑ Saiki et al. Primerstyret enzymatisk amplifikation af DNA med en termostabil DNA-polymerase  (engelsk)  // Science : journal. - 1988. - Bd. 239 . - S. 487-491 . - doi : 10.1126/science.2448875 . — PMID 2448875 .