Revers transkription PCR
Den aktuelle version af siden er endnu ikke blevet gennemgået af erfarne bidragydere og kan afvige væsentligt fra den version , der blev gennemgået den 10. juli 2020; checks kræver 2 redigeringer .I molekylærbiologi omtales revers transkriptionspolymerasekædereaktion almindeligvis som RT - PCR . RT-PCR er en metode til at amplificere et specifikt fragment af ribonukleinsyre ( RNA ). [en]
Et enkeltstrenget RNA-molekyle omdannes i en omvendt transkriptionsreaktion (RT, eng. RT, omvendt transkription ) til komplementært DNA ( cDNA ), og derefter amplificeres det allerede enkeltstrengede DNA -molekyle ved anvendelse af traditionel PCR . RT-PCR må ikke forveksles med Real - time PCR ( Q - PCR ), som også nogle gange forkert forkortes til RT-PCR . [2]
Beskrivelse af metoden
Revers transkriptase bruges til at omdanne en RNA-sekvens til komplementært DNA :
- 1. Reaktion af den første kæde: Komplementært DNA ( cDNA ) dannes på en mRNA-skabelon fra dNTP'er af enzymet revers transkriptase. Reaktionskomponenterne blandes med DNA- primer og revers transkriptasebuffer i en time ved 37°C.
- 2. Reaktion af den anden kæde: Efter revers transkription er afsluttet, og cDNA er dannet på mRNA-skabelonen, udføres de næste cyklusser i overensstemmelse med standard PCR-metoden .
Efter 30 amplifikationscyklusser genereres millioner af kopier af den ønskede sekvens. [2]
Ansøgning
RT-PCR bruges til at påvise RNA-molekyler i en prøve med en kendt sekvensregion komplementær til en primer. Eksponentiel amplifikation ved RT-PCR er en følsom teknik, der kan påvise et lille antal RNA-molekyler.
Et eksempel er RNA-vira såsom human immundefektvirus (HIV), som er et retrovirus og derfor bruger enzymet HIV - Reverse Transcriptase til at syntetisere viralt DNA, som derefter integreres i værtsgenomet .
RT-PCR er også meget brugt til diagnosticering af genetiske sygdomme og semikvantitativ bestemmelse af specifikke RNA-molekyler i en celle eller væv som en indikator for ekspressionen af de tilsvarende gener [3] .
Se også
Noter
- ↑ Hunt M. (2006) PCR-vejledning i realtid - Copyright 2006, bestyrelsen for University of South Carolina . Hentet 20. oktober 2009. Arkiveret fra originalen 4. oktober 2009.
- ↑ 1 2 Glik B., Pasternak J. Molecular biotechnology. Principper og anvendelse. - Moskva: Mir, 2002. - 589 s. — ISBN 5030033289 .
- ↑ Bustin SA Journal of Molecular Endocrinology, 25 // Absolut kvantificering af mRNA ved hjælp af realtids revers transkriptionspolymerasekædereaktionsassays . - 2000. - S. 169-193.
Litteratur
- Glick B., Pasternak J. Molekylær bioteknologi. Principper og anvendelse. - Moskva: Mir, 2002. - 589 s. — ISBN 5030033289 .
 Ordbøger og encyklopædier |
|---|