Thrombingenereringstesten er en integreret indikator for blodkoagulationssystemets tilstand .
Thrombin er det vigtigste enzym i blodkoagulationssystemet. Det katalyserer hovedreaktionen i dette system, omdannelsen af fibrinogen til fibrin . Derudover er det thrombin, der udfører hovedreguleringen af systemet, aktiverende koagulationsfaktorer V, VIII, VII, XI, XIII, protein C, blodplader , trombinaktiveret fibrinolysehæmmer. Endelig (hvilket er vigtigt fra et praktisk synspunkt) dannes der mere trombin under koagulation (10-100 gange) end alle andre koagulationsserinproteaser tilsammen. Studiet af trombins kinetik kan give en masse yderligere information, som ikke er tilgængelig fra en simpel observation af koagulationskinetikken. Fibrinklumpen er blot slutresultatet af koaguleringsprocessen; det er vigtigt at observere det, men for at forstå processens mekanismer er det nødvendigt at se dybere.
Metoder til overvågning af koncentrationen af thrombin dukkede op for ganske lang tid siden: allerede i 1960'erne blev undersøgelser af kinetikken af thrombindannelse udført meget aktivt. Den klassiske metode til bestemmelse af thrombinkoncentrationen var koagulering: en prøve med en ukendt trombinkoncentration blev blandet med ikke-rekalcificeret plasma (som i thrombintidstesten), og trombinkoncentrationen blev bestemt ud fra koagulationstiden. For at plotte thrombinkoncentrationen versus tidskurven blev prøver udtaget med korte tidsintervaller. Målingen af en enkelt kurve krævede koordineret arbejde af to højt kvalificerede laboratorieassistenter i en time, og den brede kliniske anvendelse af metoden var utænkelig.
Fremkomsten af kromogene og derefter fluorogene substrater i 1980'erne revolutionerede studiet af blodkoagulation [1] , [2] . Sådan et syntetisk substrat er et molekyle, der genkendes og skæres af serinproteinase . Dette snit fører til spaltning af signalmolekylet, mærket, fra substratet. Mærket ændrer enten den optiske densitet af opløsningen (kromogent, dvs. farvende substrat), eller er i stand til at fluorescere , når det er belyst (fluorogent substrat). Thrombinsubstrater kunne tilsættes direkte til plasmaet, og koagulationssignalet kunne registreres. Hastigheden af signalstigning er så proportional med thrombinkoncentrationen, således at thrombins tidsafhængighed opnås fra den eksperimentelle kurve ved simpel differentiering og normalisering til standardkurven. Tidlige kromogene substrater var ikke særlig bekvemme til at måle thrombingenerering, da de krævede plasmadefibrinering; ellers forstyrrede udseendet af koaguleret observationen af udseendet af det farvende molekyle. Men fluorogene substrater, som, når de blev skåret, gav et stærkt lysende mærke, gjorde det muligt at måle dannelsen af thrombin direkte i almindeligt plasma. Stigningen i produktiviteten var enorm: I stedet for at to personer målte den samme kurve i en hel time, kunne én person fylde pladen med prøver, sætte dem i pladefluorimeteret og på en time få data om flere dusin prøver.
Siden 1990'erne har en ny metode til trombingenerering været aktivt brugt i klinikken. Udviklet og udviklet af Konrad Hemker i Holland, bliver denne tilgang i stigende grad brugt i Europa hvert år, og i de senere år er den også blevet tilgængelig næsten over hele verden, inklusive Rusland. En oversigt over denne metode på russisk af dens skaber kan findes i [3] . En karakteristisk thrombingenereringskurve er vist i [1] .
Som regel skelnes der mellem to hovedparametre i den: forsinkelsestid (koagulationsforsinkelse) og endogent trombinpotentiale (areal under thrombingenereringskurven). Talrige eksperimenter og test har vist, at disse to parametre er effektive indikatorer for patologiske processer.
Som ved tromboelastografi er resultaterne af thrombingenereringstesten markant afhængige af de eksperimentelle forhold: aktiveringsmetoden, aktivatorens koncentration, brugen af blodpladefattigt eller rigt plasma, tilsætning af hjælpestoffer. Ved at ændre disse parametre er det muligt at påvise en række forskellige koagulationsforstyrrelser. Standardaktivering med en lille mængde vævsfaktor i dårligt plasma bruges til at påvise abnormiteter i plasmakoagulation [4] . Det er praktisk til masseanalyse af prøver, især når de skal transporteres eller fryses. Thrombingenerering i rigt plasma kan desuden detektere blodpladekoagulationsforstyrrelser, med succes påvise en tendens til blødning i Glanzmann trombastheni, Bernard-Souliers syndrom, ved at tage blodpladehæmmende medicin [5] . Hvis thrombomodulin tilsættes plasmaet , begynder denne test endda at opdage nogle hyperkoagulerbare lidelser: koagulationsfaktor V Leiden-mutationen, konsekvenserne af at tage orale præventionsmidler og andre [6] .