| Dithiothreitol | |
|---|---|
| Generel | |
| Systematisk navn |
( 2S,3S )-1,4-bis(sulfanyl)butan-2,3-diol |
| Chem. formel | C4H10O2S2 _ _ _ _ _ _ _ |
| Fysiske egenskaber | |
| Stat | hvidt fast stof |
| Molar masse | 154,253 g/ mol |
| Termiske egenskaber | |
| Temperatur | |
| • smeltning | 42-43°C |
| • kogning | 125-130°C |
| Klassifikation | |
| Reg. CAS nummer | 3483-12-3 |
| PubChem | 446094 |
| Reg. EINECS nummer | 222-468-7 |
| SMIL | C([C@H]([C@H](CS)O)O)S |
| InChI | InChI=1S/C4H10O2S2/c5-3(1-7)4(6)2-8/h3-8H,1-2H2/t3-,4-/m1/s1VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N |
| CHEBI | 42170 |
| ChemSpider | 393541 |
| Data er baseret på standardbetingelser (25 °C, 100 kPa), medmindre andet er angivet. | |
| Mediefiler på Wikimedia Commons | |
Dithiothreitol (dithiothreit, DTT, engelsk DTT ) er et lavmolekylært reduktionsmiddel, også kendt som Clelands reagens . Navnet på molekylet kommer fra sukker- threose med fire kulstofatomer .
Dithiothreitol er et meget stærkt reduktionsmiddel, der er i stand til at danne en seksleddet ring ved at danne en intramolekylær disulfidbinding . Ved pH 7 har den et reduktionspotentiale på -0,33 V. Reduktionen af disulfidbindinger udføres ved to successive thiol-disulfid-udvekslinger (se nedenfor). Mellemproduktet er ustabilt, da den anden thiolgruppe har tendens til at lukke ringen og danne oxideret DTT med dannelse af to reducerede disulfidbindinger. DTT udviser kun reducerende aktivitet ved pH omkring 7, da kun det negativt ladede thiolat kan danne den aktive -S - , mens den protonerede thiolform -SH er inaktiv. Thiolgruppens surhedskonstant ligger mellem pH-værdier fra 9,2 til 10,1.
Dithiothreitol bruges til at "afbeskytte" thioleret DNA. Det terminale atom af thioleret DNA i opløsning har tendens til at danne dimerer , især i nærvær af oxygen . Dimerisering reducerer i høj grad effektiviteten af efterfølgende koblingsreaktioner, såsom i tilfælde af DNA-immobilisering på guld i biosensorer . Typisk blandes DTT'en med en DNA-opløsning og får lov til at reagere, hvorefter DTT'en fjernes ved filtrering eller kromatografi . Fjernelsen af DTT kaldes afsaltning.
Dithiothreitol i biokemi bruges ofte til at genoprette disulfidbindinger i proteinmolekyler, og især intramolekylære og intermolekylære bindinger mellem cysteinrester . DTT kan dog ikke reducere disulfidbindinger, der er dybt inde i proteinstrukturen (ikke i kontakt med et opløsningsmiddel), så reduktionen af SS-bindinger udføres ofte under denaturerende betingelser (for eksempel ved opvarmning eller i nærværelse af en stærk denatureringsmiddel 6 M guanidinhydrochlorid , 8 M urinstof eller 1 % natriumdodecylsulfat ). Og følgelig kan tilstedeværelsen af disulfidbindinger på proteinoverfladen undersøges ved deres reduktion i tilstedeværelsen af DTT.
DTT bruges også som et oxidationsmiddel. Fordelen ved DTT er, at den ikke danner blandede disulfidbindinger, hvilket er forskelligt fra glutathion . I meget sjældne tilfælde kan DTT danne addukter, for eksempel kan to svovlatomer danne disulfidbindinger med andre svovlatomer; i sådanne tilfælde kan DTT ikke cyklisere.
DTT oxideres let af atmosfærisk oxygen og er derfor en relativt ustabil kemisk forbindelse. Da protonerede svovlatomer er mindre nukleofile , er DTT et svagere reduktionsmiddel ved sur pH .