X-gal

5-brom-4-chlor-3-indoyl-beta-D-galactopyranosid
Generel
Systematisk
navn
5-brom-4-chlor-3-indoyl-beta-D-galactopyranosid
Chem. formel C14H15BrClNO6 _ _ _ _ _
Fysiske egenskaber
Molar masse 408,629 g/ mol
Klassifikation
Reg. CAS nummer 7240-90-6
PubChem
Reg. EINECS nummer 230-640-8
SMIL   C1=CC(=C(C2=C1NC=C2O[C@H]3[C@H]([C@H]([C@H]([C@H](O3)CO)O)O )O)Cl)Br
InChI   InChI=1S/C14H15BrClNO6/c15-5-1-2-6-9(10(5)16)7(3-17-6)22-14-13(21)12(20)11(19)8( 4-18)23-14/h1-3,8,11-14,17-21H,4H2/t8-,11+,12+,13-,14-/m1/s1OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N
CHEBI 75055
ChemSpider
Data er baseret på standardbetingelser (25 °C, 100 kPa), medmindre andet er angivet.
 Mediefiler på Wikimedia Commons

X-gal (også BCIG fra engelsk  bromo-chlor-indolyl-galactopyranoside ) er en organisk forbindelse bestående af galactose kombineret med indol . Det er meget udbredt som et substrat for beta-galactosidaser i genteknologi og molekylærbiologi .

Ansøgning

Kloning

X-gal bruges i genkloning til at bestemme cellulær ekspression af β-galactosidase- enzymet kodet i lacZ -genet .

X-gal spaltes af β-galactosidaser til dannelse af galactose og 5-brom-4-chlor-3-hydroxyindol. Sidstnævnte oxideres til 5,5'-dibrom-4,4'-dichlor-indigo, et uopløseligt farvet produkt. X-gal tilsættes til en petriskål eller kulturkolbe sammen med en β-galactosidase-inducer, såsom IPTG .

X-gal giver dig mulighed for visuelt at bestemme, hvilke E. coli -kolonier der er blevet transformeret med den ønskede vektor. Normalt syntetiseres enzymet kodet af lacZ-genet i E. coli-celler under påvirkning af IPTG-induceren, og blå farvning går tabt i celler, der indeholder en genetisk manipuleret konstruktion, hvori lacZ-genet er forstyrret som følge af en genetisk indskud.

Reporter

lacZ - genet kan bruges som reporter, når bakterier eller gær dyrkes på et medium indeholdende X-gal. Når målgenpromotoren er koblet til den kodende del af galactosidasegenet, resulterer binding af aktivatorproteinet til promotoren i dannelsen af ​​et farvet X-gal-spaltningsprodukt. [en]

Vandudforskning

X-Gal bruges til at påvise E. coli og relaterede bakterier i vandprøver.

Noter

  1. Joung J., Ramm E., Pabo C. Et bakterielt to-hybrid-selektionssystem til undersøgelse af protein-DNA og protein-protein-interaktioner  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America  :  journal. - 2000. - Vol. 97 , nr. 13 . - s. 7382-7387 . - doi : 10.1073/pnas.110149297 . — PMID 10852947 .