N-ethylmaleimid

Den aktuelle version af siden er endnu ikke blevet gennemgået af erfarne bidragydere og kan afvige væsentligt fra den version , der blev gennemgået den 13. oktober 2019; verifikation kræver 1 redigering .
N-ethylmaleimid
Generel
Systematisk
navn		 1-ethylpyrrol-2,5-dion
Forkortelser NEM
Traditionelle navne Ethylmaleimid
Chem. formel C 6 H 7 NO 2
Fysiske egenskaber
Molar masse 125,12528 g/ mol
Termiske egenskaber
Temperatur
 •  smeltning 43-46°C
 •  kogning 210°C
Klassifikation
Reg. CAS nummer 128-53-0
PubChem 4362
Reg. EINECS nummer 204-892-4
SMIL   O=C1\C=C/C(=O)N1CC
InChI   1/C6H7NO2/c1-2-7-5(8)3-4-6(7)9/h3-4H,2H2,1H3HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N
CHEBI 44485
ChemSpider 4209
Data er baseret på standardbetingelser (25 °C, 100 kPa), medmindre andet er angivet.
 Mediefiler på Wikimedia Commons

N -ethylmaleimid (NEM) er et derivat af maleinsyre . Det indeholder en imidfunktionel gruppe og er en aktiveret alken , der reagerer med thioler og bruges ofte til at modificere cysteinrester i proteiner og peptider [1] .

Kemiske egenskaber

N -ethylmaleimid er en Michael-acceptor . Det betyder, at det kan tilføje nukleofiler såsom thioler. Thioetheren dannet som følge af en sådan reaktion har en meget stærk C-S-binding, og reaktionen er praktisk talt irreversibel. Reaktionen forløber ved pH 6,5-7,5. N -ethylmaleimid kan reagere med aminer eller undergå hydrolyse ved mere basisk pH. N -ethylmaleimid er blevet brugt i vid udstrækning til at bestemme den funktionelle rolle af thiolgrupper i enzymologi . Det er en irreversibel hæmmer af alle cysteinpeptidaser, da den udfører alkyleringen af ​​thiolgrupper i det aktive center (se diagram) [2] [3] .

Casestudier

NEM blokerer vesikulær transport . Lysisbuffere med 20-25 mM N -ethylmaleimid bruges til at hæmme proteindesumoylering under Western blotting . NEM bruges også som en deubiquitinyleringshæmmer .

Arthur Kornberg og kolleger brugte N -ethylmaleimid til at slukke for DNA-polymerase III og sammenligne dens aktivitet med DNA-polymerase I. Kornberg blev tildelt Nobelprisen for opdagelsen af ​​DNA-polymerase I, som på det tidspunkt blev betragtet som den vigtigste polymerase i bakteriel replikation , selvom hans søn Thomas senere viste, at den vigtigste replikative polymerase i bakterier er DNA-polymerase III, som endnu ikke var opdaget på det tidspunkt.

N -ethylmaleimid aktiverer ouabain-ufølsomt klorafhængigt indtag af kaliumioner i røde blodlegemer hos får og geder [4] . Seksten år senere bidrog denne opdagelse til opdagelsen af ​​K + /Cl - co -transportører i humane embryonale celler, som introducerede cDNA-isoformer af KCC1 [5] . Siden da er N -ethylmaleimid blevet brugt i vid udstrækning som et diagnostisk værktøj til at bestemme tilstedeværelsen af ​​K + /Cl - symporter i cellerne fra forskellige dyrearter [6] [7] [8] [9] .

Noter

  1. ↑ Thiol-reaktive prober Arkiveret fra originalen den 28. januar 2008. hos Invitrogen
  2. ↑ Nelson, D.L.; Cox, M. M. "Lehninger, Principles of Biochemistry" 3. udg. Worth Publishing: New York, 2000.
  3. ↑ Gregory, JD (1955) J. Am. Chem.
  4. ↑ En chloridafhængig K+ flux induceret af N-ethylmaleimid i genetisk lavt K+ fåre- og gedeerythrocytter.
  5. ↑ Gillen CM, Brill S, Payne JA, Forbush B 3rd: Molekylær kloning og funktionel ekspression af K-Cl-cotransporteren fra kanin, rotte og menneske.
  6. ↑ Regulering af K-Cl-cotransport: fra funktion til gener.
  7. ↑ K+ Cl Cotransport: Sulfhydryl, divalente kationer og mekanismen for volumenaktivering i en rød celle.
  8. ↑ . doi : 10.1016/j.cell.2009.05.031 .
  9. ↑ Jennings, ML & Al-Rohil, NSJ gen. physiol. 95, 1021-1040, 1990

Eksterne links