Farvet med hæmatoxylin og eosin
Hæmatoxylin og eosin-farvning (hæmatoxylin-eosin-farvning) er en af de mest almindelige farvningsmetoder i histologi . Det er meget udbredt i medicinsk diagnostik , især i onkologi til farvning af fjernet eller biopsieret væv.
Farvning omfatter brugen af det grundlæggende farvestof hæmatoxylin , som farver basofile cellestrukturer i lyseblåt, og alkoholsyrefarven eosin Y , som farver eosinofile cellestrukturer i rød-pink. Basofile strukturer er generelt dem, der indeholder nukleinsyrer ( DNA og RNA ): cellekernen , ribosomer og RNA-rige områder af cytoplasmaet . Eosinofile strukturer indeholder intra- og ekstracellulære proteiner , såsom Lewy-legemer . Cytoplasmaet er et eosinofilt medium. Erytrocytter farves altid lyse røde.
Hæmatoxylin-eosin-farvningsteknik
- Paraffin fjernes fra sektionerne i orthoxylen eller toluen , udføres med alkoholer af faldende koncentration og bringes til vand (to portioner xylen eller toluen - 3-5 minutter, 96 ° ethanol - 3 minutter, 80 ° ethanol - 3 minutter, 70 ° ethanol - 3 minutter, destilleret vand - 5 minutter).
- Farvet med hæmatoxylin i 7-10 minutter (afhængig af farvestoffets modenhed).
- Skyl i destilleret vand i 5 minutter.
- Differentier i 1% saltsyre i 70° ethanol, indtil sektionerne bliver brune.
- Skyl med destilleret vand og derefter med en svag (0,5%) ammoniakopløsning , indtil sektionerne bliver blå.
- Farvet med en vandig opløsning af eosin i 0,5-1 minut (afhængig af den ønskede farve).
- Vaskes i tre portioner destilleret vand for at fjerne overskydende eosin.
- Fjern vand fra sektioner i en portion 70° ethanol, to portioner 96° ethanol. Eksponering i hver portion alkohol - 2 minutter.
- Sektioner klares i to portioner carbol-xylen (en blanding af smeltet phenol og xylen eller toluen i forholdet 1:4 eller 1:5) - 1 minut.
- Sektionerne dehydreres i to portioner xylen eller toluen. Bliv skiver 2 minutter.
- Omslut sektionerne i canadisk balsam eller syntetisk medium for at omslutte histologiske snit.
Nogle strukturer farves ikke godt med hæmatoxylin og eosin (normalt hydrofobisk ) og kræver andre farvningsmetoder. For eksempel forbliver områder af celler rige på lipider og myelin ufarvede: adipocytter , myelinskeden af axoner af neuroner , membranen af Golgi-apparatet osv.
Se også
Links