Allophycocyanin (fra græsk : ἄλλος (allos) - "andet", φύκος (phycos) - "alger", og κυανός (kyanos) - "blå") er et lys-høstende protein fra phycobiliprotein - familien , som også omfatter phycobiliprotein-familien , phyc . og phycoerythrocyanin , og er et hjælpepigment til klorofyl . Alle phycobiliproteiner er vandopløselige og kan derfor ikke membranforankres som carotenoider , men danner i stedet membranforankrede klynger kaldet phycobilisomes . Allophycocyanin absorberer og udsender rødt lys (henholdsvis 650 og 660 nm), og kan let påvises i cyanobakterier og rødalger . Phycobilins evne til at udsende lys bruges i immunoassay-sæt. Allophycocyanin bruges ofte i flowcytometri , celletælling og -sortering og mikroskopi . For at gøre dette indføres kemisk tværbinding i den.
Allophycocyanin kan isoleres fra forskellige typer røde eller blågrønne alger, som hver syntetiserer sin egen, lidt anderledes form af dette molekyle. Proteinet består af to typer underenheder (α og β), der hver bærer en kromoforgruppe af phycocyanobilin . Den generelle formel for et protein kan beskrives som (αβ) 3 . Molekylvægten af allophycocyanin er 105 kDa.
| Absorption maksimum | 652 nm |
| Ekstra absorptionsmaksimum | 625 nm |
| Strålingsmaksimum | 657,5 nm |
| Stokes skifter | 5,5 nm |
| ekstinktionskoefficient | 2,4 x 105 M −1 cm −1 |
| kvante output | 0,68 |
| Lysstyrke | 1,6 x 10 5 M −1 cm −1 |
Tværbundet allophycocyanin
Som nævnt ovenfor skal det for at anvende allophycocyanin i et immunassay være kemisk tværbundet for at forhindre dissociation af dets underenheder, hvilket forekommer ret ofte i standard fysiologiske buffere. [1] Den traditionelle metode til dette er blanding med 1-ethyl-3,3-dimethylaminopropyl, et kraftigt tværbindingsmiddel. Derefter behandles det med en otte molær opløsning af urinstof og får derefter lov til at renaturere, men allerede i en fysiologisk buffer. Denne procedure giver dig mulighed for at slippe af med ikke-tværbundne underenheder. [2] Der er alternative metoder, hvis brug giver dig mulighed for at gemme trimerens native struktur og få et lysere slutprodukt [3] .