Peberrodsperoxidase

Peberrodsperoxidase ( HRP ) er et  enzym isoleret fra peberrod , der er almindeligt anvendt i molekylærbiologiske teknikker til at øge et svagt signal til et niveau, der kræves til påvisning. Peberrodsperoxidase har en molekylvægt på ca. 44173,9 Da, er et glycoprotein og har fire lysinaminosyrerester til at binde til det molekyle, der skal mærkes.

Peberrodsperoxidaseaktivitetsproduktet er en farve- eller luminescerende forbindelse, der er egnet til påvisning og kvantificering. HRP bruges ofte som en del af konjugater til påvisning af visse molekyler. For eksempel, i tilfælde af Western blotting , anvendes HRP-konjugater med antistoffer mod målproteiner eller molekyler; i dette tilfælde har antistoffet specificitet for et givet mål, og HRP danner et detekterbart signal. [2] . Peberrodsperoxidase bruges også i teknikker som ELISA og til immunhistokemisk analyse.

Peberrodsperoxidase er et ideelt enzym til mange anvendelser, fordi det er relativt lille, relativt stabilt og billigere end alternativer såsom alkalisk fosfatase . HRP har et større antal omdrejninger pr. tidsenhed og sikrer derfor udviklingen af ​​et tilstrækkeligt stærkt signal på relativt kort tid.

Ansøgning

I de senere år er teknikken til at mærke neuroner med peberrodsperoxidase blevet et af de vigtigste forskningsværktøjer. På kort tid er peberrodsperoxidase blevet brugt af flere neurovidenskabsmænd end Golgi-farvemetoden siden 1870. [3]D. Purves og JW Lichtman, principper for neural udvikling.

Peberrodsperoxidase i fri form eller i form af konjugater med andre molekyler kræver tilstedeværelsen af ​​et substrat til billeddannelse. HRP oxiderer substratet i nærvær af hydrogenperoxid , hvilket producerer produkter, der kan detekteres spektrofotometrisk . [fire]

Kommercielt tilgængelige peberrodsperoxidasesubstrater 3,3',5,5'- Tetramethylbenzidin ( TMB ) og 3,3' - Diaminobenzidin ( DAB ) giver farvede produkter ved oxidation, mens SuperSignal og ECL . kemiluminescerende 

Chemiluminescence enhancement (ECL)

Peberrodsperoxidase katalyserer oxidationen af ​​luminol til 3 -aminophthalat via en række mellemprodukter . Denne reaktion er ledsaget af en lavintensitetsglød med en bølgelængde på 428 nm. I nærvær af visse stoffer er det muligt at opnå en stigning i luminescens op til tusind gange. Fænomenet luminescensforbedring kaldes forstærket kemiluminescens ( ECL ) .  De mest effektive forstærkere er phenolderivater, såsom p-iodphenol. ECL tillader detektion af ca. 0,5 picogram nukleinsyre på Southern blot .

Noter

1. ↑ PDB 1w4w ; Carlsson GH, Nicholls P., Svistunenko D., Berglund GI, Hajdu J. Complexes of Peberrodsperoxidase med formiat, acetat og carbonmonoxid  //  Biochemistry: journal. - 2005. - Januar ( bind 44 , nr. 2 ). - s. 635-642 . - doi : 10.1021/bi0483211 . — PMID 15641789 .
2. ↑ Chau YP, Lu KS Undersøgelse af blodgangliebarriereegenskaberne i sympatiske rotteganglier ved at bruge lanthanion og peberrodsperoxidase som sporstoffer   // ACTA ANATOMICA (BASEL): journal . - 1995. - Bd. 153 , nr. 2 . - S. 135-144 . — PMID 8560966 .
3. ↑ I de senere år er teknikken til at markere neuroner med enzymet peberrodsperoxidase blevet et vigtigt værktøj. I sin korte historie er denne metode sandsynligvis blevet brugt af flere neurobiologer , end der har brugt Golgi-farven siden dens opdagelse i 1870
   Citeret i "Cell Marking with Horseradish Peroxidase" Arkiveret 24. april 2005 på Wayback Machine tilpasset fra D. Purves og JW Lichtman , Principper for neural udvikling. Sinauer Associates, Inc., Sunderland, 1985.
4. ↑ NCVeitch. Peberrodsperoxidase: et moderne syn på et klassisk  enzym //  Fytokemi : journal. - 2004. - Bd. 65 , nr. 3 . - S. 249-259 . - doi : 10.1016/j.phytochem.2003.10.022 .

Eksterne links

• MeSH Peberrod+peroxidase