Fotoblegning

Den aktuelle version af siden er endnu ikke blevet gennemgået af erfarne bidragydere og kan afvige væsentligt fra den version , der blev gennemgået den 8. juli 2019; verifikation kræver 1 redigering .

Fotoblegning ( fotofading, lysblegning ) er den fotokemiske ødelæggelse af en fluorofor . I mikroskopi kan fotoblegning gøre det vanskeligt at observere fluorescerende molekyler , da sidstnævnte ødelægges over tid, når de bestråles med lys, der forårsager fluorescens.

Fotoblegning kan bruges før påføring af antistof -koblede fluoroforer til at slukke autofluorescens og dermed reducere baggrundssignalniveauet.

Lysblegning kan bruges til at studere molekylers bevægelse eller diffusion , for eksempel ved brug af ( eng. FRAP , Fluorescence recovery after photobleaching ) eller ( eng. FLIP , Fluorescence loss in photobleaching ).

Reduktion af effekten af fotoblegning kan kontrolleres ved at reducere intensiteten eller varigheden af eksponering for lys, øge koncentrationen af fluoroforen, reducere frekvensen (og fotonenergien) af det absorberede lys eller bruge fluoroforer, der er mere modstandsdygtige over for nedbrydning, som f.eks. som Alexa eller DyLight Fluor.

Varighed

Afhængigt af deres særlige kemi kan molekyler fotoblege efter at have absorberet nogle få fotoner, mens stærkere molekyler kan gennemgå mange absorptions-/emissionscyklusser, før de nedbrydes:

Grønt fluorescerende protein ( eng. GFP ): 10 4 -10 5 ; 0,1-1 s
Almindelig organisk farvestof: 10 5 -10 6 ; 1-10 sek
CdSe/ZnS: 108 ; > 1000 minutter

Links

Introduktion til optisk mikroskopi . Fotoblegningsartikel (på engelsk)
Viegas MS, Martins TC, Seco F., do Carmo A. En forbedret og omkostningseffektiv metode til reduktion af autofluorescens i direkte immunfluorescensundersøgelser på formalinfikserede paraffinindlejrede væv (engelsk) // Eur J Histochem : journal. - 2007. - Bd. 51 , nr. 1 . - S. 59-66 . — PMID 17548270 .