Gult fluorescerende protein

Gult fluorescerende protein er en  genetisk mutant form af grønt fluorescerende protein ( GFP ) isoleret fra Aequorea victoria vandmænd . Det er karakteriseret ved et absorptionsmaksimum ved 514 nm og et fluorescensmaksimum ved 527 nm. Det er meget brugt som et fluorescerende mærke i celle- og molekylærbiologi til at studere ekspressionen af ​​cellulære proteiner. Ud over det er der udviklet en række andre mutante former for GFP , såsom blå, cyan osv. [1] .

Ansøgning om FRET

Absorptionsspektret af YFP overlapper ret kraftigt med fluorescensspektret af CFP ( eng.  Cyan Fluorescent Protein ), så disse to fluoroforer bruges til at skabe biosensorer , som er baseret på Förster energy transfer (FRET) fænomenet . Sådanne sensorer bruges til at detektere visse hændelser, der forekommer i levende celler. Især enzymaktivitet kan bestemmes på denne måde .

Som regel inkluderer molekylet i en sådan sensor 4 domæner [2] :

  1. proteinet, der er bæreren af ​​sensoren (det kan være næsten ethvert protein);
  2. fluorofor CFP ;
  3. et domæne, der ændrer sin struktur som reaktion på en bestemt effekt (for eksempel phosphorylering );
  4. fluorofor YFP .

Når en sådan sensor bestråles med en laser med en bølgelængde, der kun exciterer CFP (f.eks. 440 nm - exciterer næsten ikke YFP , men exciterer kraftigt CFP ), kan man observere fluorescensen af ​​begge fluoroforer. Efter en passende påvirkning af domæne 3 ændres sensorens struktur, som et resultat af hvilket YFP -fluoroforen bevæger sig væk fra CFP'en , og effektiviteten af ​​Förster-overførsel falder (afhængigt af hvor langt fluoroforerne var adskilt fra hinanden). Som et resultat stiger fluorescensintensiteten af ​​CFP , mens YFP falder. Således kan forholdet mellem YFP - fluorescens og CFP -fluorescens bruges til at kvantificere ændringen i biosensorkonformation .

Noter

  1. Uemura, T.; Kim, H.; Saito, C.; Ebine, K.; Ueda, T.; Schulze-Lefert, P.; Nakano, A. Qa-SNARE'er lokaliseret til trans-Golgi-netværket regulerer flere transportveje og ekstracellulær sygdomsresistens i planter  (engelsk)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America  : journal. - 2012. - Bd. 109 , nr. 5 . - S. 1784-1789 . - doi : 10.1073/pnas.1115146109 . — PMID 22307646 .
  2. Adgang: Midzoneaktivering af aurora B i anafase producerer en intracellulær fosforyleringsgradient: Natur . Hentet 7. december 2010. Arkiveret fra originalen 31. oktober 2010.

Se også

Bibliografi

Links