Fiksering (histologi)

Fiksering er behandlingen af ​​en prøve beregnet til mikroskopi for så vidt muligt at bevare deres strukturer i uændret tilstand [1] . Ellers, under påvirkning af sine egne enzymer, virkningen af ​​forrådnende organismer, og af andre årsager, bliver prøven uegnet til forskning. Det bruges i histologi og mikrobiologi , patologisk anatomi . De mest almindelige kemiske metoder til fiksering; i mikrobiologi bruges varmefiksering ofte.

Fiksering af prøven går forud for dens farvning, med undtagelse af vital farvning . I histologi er fiksering trinnet umiddelbart efter prøveoptagelse.

Generelle krav til klemmer

• Fastgørelserne skal virke hurtigt.
• Bør ikke forårsage deformation af væv eller gøre dem sprøde.
• De skal overføre det cellulære indhold til en tilstand, der er uopløselig i vand og andre væsker, der bruges i den videre behandling af lægemidlet.
• Bør ikke forårsage mørkfarvning af stoffet, men tværtimod bidrage til dets oplysning.
• Bør ikke danne fikseringsartefakter i cellerne.
• Bør ikke forstyrre farvningen af ​​præparatet ved den valgte metode. Dette gælder især ved anvendelse af immunhistokemiske farvningsmetoder; for eksempel ved anvendelse af konventionel formalin, kan antigene strukturer ofte ikke påvises, i sådanne tilfælde anbefales det at bruge bufferet (neutral) formalin.

Befæstelsestyper

Der findes ingen universelle fiksatorer, der er lige velegnede til alle formål. Valget af fikseringsløsning er baseret på dens fordele og ulemper ved at arbejde med en bestemt type materiale og egnethed til en bestemt mikroskopisk undersøgelsesmetode.

Formalin

Den mest almindelige type fikseringsløsning . Enkel, billig, relativt lav risiko for arbejderen. Vandige opløsninger af formaldehyd anvendes i ren form og som en del af blandinger med andre stoffer, for eksempel med eddikesyre . Ulempen ved formalinfikseringsmidler er overdreven vævskomprimering [2] . Derudover er et hvidt bundfald (krystaller af myresyre ) ofte muligt, når man bruger ren formalin. Derfor bruges "pufret" neutral formalin oftere.

Spiritus

Ren ethylalkohol bruges sjældent, da det kan rynke materialet.

• Shaffers blanding  - består af 2 dele 80% ethylalkohol og 1 del formalin. Varighed af fiksering 1 - 2 dage.
• Carnoys blanding  - fra 6 dele absolut ethylalkohol, 3 dele chloroform og 1 del eddikesyre. Forberedes umiddelbart før brug. Varighed af fiksering 1/2 - 3 timer. Blandingen er velegnet til fastgørelse af genstande med tætte skaller (insekter, rundorme).
• Dietrichs væske er en blanding af ethylalkohol, formalin, eddikesyre og vand. Varighed af fiksering 8 - 24 timer. Velegnet til leddyr [3] .

Baseret på picrinsyre

Genstande fastgjort med blandinger baseret på picrinsyre er ustabile i vand, så efter fiksering overføres genstanden til 70% alkohol. Efter fiksering får objektet en gul farve, som normalt ikke forstyrrer arbejdet.

• En blanding af picrinsyre og eddikesyre. Mættet opløsning af picrinsyre i 10% eddikesyre. Velegnet til små og sarte genstande.
• Bouin blanding . 15 dele af en mættet vandig opløsning af picrinsyre, 5 dele formalin, 1 del eddikesyre. Varighed af fiksering er 2 timer. Så kan genstandene opbevares i lang tid uden at fordærve direkte i fikseringsopløsningen [3] .

Sublimer

Sublimatbaserede fikseringsmidler virker langsomt. brugt i histologi. Gode ​​nukleare fikseringsmidler [4] .

Osmisk syre

Fixativer baseret på osmisk syre ændrer kun lidt strukturen af ​​væv og celler. Gode ​​nukleare fikseringsmidler. De pletter fedtstoffer i en mørk farve [5] . I elektronmikroskopi bruges det som kontrastmiddel. Ekstrem toksicitet og høje omkostninger begrænser brugen af ​​osmiumfikseringsmidler.

Fodnoter

1. ↑ Roskin, 1946 , s. 81.
2. ↑ Roskin, 1946 , s. 88-89.
3. ↑ 1 2 Roskin, 1946 , s. 91.
4. ↑ Roskin, 1946 , s. 93.
5. ↑ Roskin, 1946 , s. 95.

Litteratur

• Roskin G. I. Mikroskopisk teknik. - M . : Statens Forlag "Sovjetvidenskab", 1946.