Replikmetode (mikrobiologi)

Den aktuelle version af siden er endnu ikke blevet gennemgået af erfarne bidragydere og kan afvige væsentligt fra den version , der blev gennemgået den 16. august 2021; checks kræver 32 redigeringer .

Replikering er en mikrobiologisk teknik, hvor en eller flere sekundære petriskåle indeholdende forskellige faste (agarbaserede) selektive vækstmedier (fri for næringsstoffer eller indeholdende kemiske væksthæmmere såsom antibiotika) inokuleres med de samme kolonier af mikroorganismer fra den primære petriskål. , der gengiver det indledende rumlige billede af placeringen af ​​bakteriekolonier i forhold til hinanden.

Historie

I 1925 foreslog Esther og Joshua Lederberg en koloniformeringsmetode.

Lederberg havde til formål at bruge en klud, der kan steriliseres, og som også har en lodret luv, der ligner en todimensionel analog "trådbørste" - et klassisk kolonioverførselsværktøj.

Til at begynde med brugte man papir og nylonfløjl, men disse belægninger blev senere udgået på grund af en række problemer, såsom at papir forvanskede bakteriekoloniens oprindelige mønster, og at nylonfløjl var for dyrt. Således blev der valgt bomuldsfløjl som omslag til frimærket.

Replikametoden finder sin anvendelse i mikrobiologien af ​​både pro-(bakterier) og eukaryoter (gær).

Metode

Til overførsel bruges et Lederberg-stempel: et sterilt fløjlsstof strækkes over en cylinder med en diameter svarende til den indvendige diameter af en petriskål. Først presses dette stempel mod det originale petriskål, bevokset med kolonier, og derefter med endnu ikke bevokset. Overførsel af materiale fra hver koloni på samme sted til en ikke-spiret plade, der inkuberes for at dyrke kolonier.

Fløjlsfibre forhindrer udtværing af kolonier. Fra den originale petriskål (matrix) dækket med kolonier kan der således laves flere aftryk på forskellige gelmedier.

Som regel overføres ~30-300 kolonier på grund af vanskeligheden ved at isolere hver koloni separat.

Ansøgning

Replikametoden kan bruges til at søge efter og isolere mangelfulde mutanter, det vil sige mikroorganismer, der i modsætning til moderstammen ikke er i stand til at producere visse stoffer, der er nødvendige for deres vækst og reproduktion, og derfor er afhængige af tilstedeværelsen af ​​disse stoffer i kulturmedium.

Litteratur

Arnold Berk, David Baltimore, Harvey Lodish, James Darnell, Paul Matsudaira, S. Lawrence Zipursky: Molekulare Zellbiologie . 2. Auflage, Walter de Gruyter, 1996. ISBN 9783110810578, S. 199

Links