Edman metode

Edman - nedbrydningsmetoden er en af  ​​de tidlige metoder til bestemmelse af den primære sekvens ( sekventering ) af peptider. Udviklet i 1950-1956 af den svenske biokemiker Per Victor Edman. Essensen af ​​metoden ligger i behandlingen af ​​det undersøgte peptid med et bestemt sæt reagenser, hvilket fører til spaltning af en aminosyre fra N-terminalen af ​​sekvensen. Cyklisk gentagelse af reaktionen og analyse af reaktionsprodukterne giver information om rækkefølgen af ​​aminosyrer i peptidet.

Edmans metode blev meget brugt i anden halvdel af det 20. århundrede, men er nu praktisk talt ikke brugt på grund af mange af dens iboende mangler (ikke-kvantitativ reaktion, flere sideprocesser).

Metode

FITC ( phenylisothiocyanat ) er et reagens, der bruges til at bestemme den N-terminale aminosyre i et peptid . Det er i stand til at reagere med alfa-aminosyrer og alfa-carboxylgruppen af ​​frie aminosyrer. Som et resultat af interaktion med polypeptidets N-terminale aminosyre dannes et phenylthiohydantoin-derivat, hvori bindingen mellem alfa-carboxylgruppen i den N-terminale aminosyre i peptidet destabiliseres. Denne binding hydrolyseres selektivt uden at beskadige andre peptidbindinger. Efter reaktionen isoleres FITC-komplekset med den N-terminale aminosyre og identificeres ved en kromatografisk metode. Denne proces gentages derefter med det trunkerede peptid. På denne måde opnås sekvensen af ​​aminosyrer i peptidet.

Kilder

Se også